[发明专利]一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法

权利要求书

1.一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）将1-3mm³山羊胰腺组织清洗后离心，弃上清，然后向离心后的沉淀中添加消化液进行山羊胰腺组织消化处理；所述沉淀与消化液的质量体积比为1g/10mL；所述消化液由DMEM/F12培养基中添加胶原酶Ⅳ和EGTA配制而成，所述胶原酶Ⅳ在DMEM/F12培养基中的浓度为1mg/mL，所述EGTA在DMEM/F12培养基中的浓度为0.001 mol/mL；

（2）终止消化后，离心并弃上清，用原代培养基混匀离心后的沉淀，得山羊胰腺腺泡悬液；所述沉淀与原代培养基的质量体积比为1g/5mL；所述原代培养基由DMEM/F12培养基中添加FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF配制而成，所述FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF在DMEM/F12培养基中的浓度或体积百分比浓度分别为：10%、10%青链霉素混合液、2.5 μg/mL、2.5 μg/mL、10 μg/mL和10 ng/mL；

（3）依次采用差时消化、差时贴壁及细胞刮取的方式对山羊胰腺腺泡细胞悬液中的山羊胰腺腺泡细胞进行纯化处理；

（4）将纯化处理后所得的山羊胰腺腺泡细胞接种至传代培养基中进行传代培养；所述传代培养基由DMEM/F12培养基中添加FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF配制而成，所述FBS、青链霉素混合液、庆大霉素、两性霉素、胰岛素和EGF在DMEM/F12培养基中的浓度或体积百分比浓度分别为：10%、2%青链霉素混合液、2.5 μg/mL、2.5 μg/mL、10 μg/mL和10 ng/mL；

（5）对传代培养后的山羊胰腺腺泡细胞进行鉴定。

2.如权利要求1所述的山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，步骤（1）中所述的消化处理是于37℃、80rpm/min条件下摇床消化时间为20min。

3.如权利要求1所述的山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，步骤（1）中所述的离心条件是1000 rpm/min离心5min；步骤（2）中所述的离心条件是600 g/min离心5 min。

4.如权利要求1所述的山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中所述的终止消化是用含有FBS的DMEM/F12培养基中培养基终止，所述DMEM/F12培养基中的体积百分比浓度为10%。

5.如权利要求1所述的山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，步骤（5）中所述的鉴定是利用CPA1抗体鉴定山羊胰腺腺泡细胞。

6.如权利要求3所述的山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，其特征在于，所述的鉴定是利用CPA1抗体作为一抗识别山羊腺泡细胞中的CPA1，再用带荧光的二抗与一抗结合来显示CPA1蛋白。