[发明专利]一种重组鸭3型腺病毒fiber-2基因的表达方法

权利要求书

1.一种重组鸭3型腺病毒fiber-2基因的表达方法，其特征在于，所述重组鸭3型腺病毒fiber-2的基因序列如SEQ NO 1所示；

所述表达方法采用的表达系统是通过尿嘧啶缺陷型马克斯克鲁维酵母工程菌构建的；

所述表达方法采用的表达载体为pUKD-N115；

所述表达方法包括以下步骤：

1)将鸭3型腺病毒fiber-2基因按照尿嘧啶缺陷型马克斯克鲁维酵母偏爱密码子进行序列优化，制备成重组鸭3型腺病毒fiber-2基因；

2)将重组鸭3型腺病毒fiber-2基因与载体pUKD-N115连接；

3)将连接产物转化到尿嘧啶缺陷型马克斯克鲁维酵母TOP1中进行表达；

4)获取表达后产物TOP-DAdV-3并进行鉴定；

5)高密度发酵TOP-DAdV-3，获得重组菌液；

6)对重组菌液进行纯化，制备成重组蛋白；

步骤6)纯化后的蛋白终浓度为453μg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种重组鸭3型腺病毒fiber-2基因的表达方法，其特征在于，步骤2)的载体pUKD-N115经SmaI、NotI双酶切后进行连接。

3.根据权利要求1所述的一种重组鸭3型腺病毒fiber-2基因的表达方法，其特征在于，步骤6)的纯化过程为：先用含0.75M NaCl的PBS缓冲液混合重组菌液；然后用高压均质仪在压力1300bar的条件下破碎2次；在8000rpm条件下离心5min，并用0.2μm，100K超滤膜包浓缩微孔滤膜抽滤。