[发明专利]一种固定化培养凝胶载体的制备装置及其方法和应用

说明书

本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种固定化培养凝胶载体的制备装置及其方法和应用，包括呈皿状结构的片剂制备模具及设于片剂制备模具上的若干制模柱体、呈皿状结构的片剂切割装置及设于片剂切割磨具上的若干第一切割内筒、呈皿状结构的顶盖切割装置及设于顶盖切割装置上的若干第二切割内筒；本发明提供的固定化细胞培养载体的制备装置，克服了固定化培养的载体制备困难，能便捷地将孢子镶嵌于载体中固定培养，载体制备装置能直接匹配90mm培养皿，该装置容易在实验室复现，可操作性强。而固定化细胞培养方法中丛枝菌根真菌的菌丝伸长非常活跃，子代孢子产量也有明显提升，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种固定化培养凝胶载体的制备装置及其方法和应用。

背景技术

丛枝菌根(Arbuscular Mycorrhizal)真菌是一类专性活体营养型真菌,属于球囊霉亚门，80％的陆生植物可以与之共生，植物与丛枝菌根真菌建立共生关系后，能有效促进矿质养分的获取、提高植物对干旱、病虫害和重金属毒害的耐受性。因此，丛枝菌根真菌作为微生物菌肥在农林业生产上具有重大应用潜力。

为了对丛枝菌根真菌孢子进行扩繁，利用人工纯培养是最有效的技术。近期研究表明，肉豆蔻酸能作为丛枝菌根真菌非共生生长的碳源和能源，培养基中添加肉豆蔻酸能有效促进AM真菌的非共生生长。这类非共生培养方法与传统的通过丛枝菌根真菌与活体寄主植物根系建立共生关系的扩繁方法相比，培养周期更短，并简化了操作，也摆脱了寄主植物根系生长势对孢子扩繁的限制。

植物细胞固定化培养技术是将植物悬浮细胞包埋在多糖或多聚化合物的支持物中进行无菌培养的技术。动物细胞固定化培养技术是将动物细胞与水不溶性载体结合起来，再进行培养。具有细胞生长密度高、抗污染能力强和有利于产物分离纯化等优点。制备方法很多，包括吸附法、共价贴附法、离子/共价交联法、包埋法、微囊法等。现有专利(公开号为 US5112750A)通过将微生物细胞固定在其中分散有对细胞有害的有机溶剂的吸收剂的凝胶载体中来制备新的固定化细胞。通常培养这些固定化细胞的方法在含有有机溶剂的介质中使用，或者在没有任何先前灭菌的情况下添加有机溶剂，但是该方法不能有效防止真菌菌丝的聚集，同时培养基成分在植物凝胶片状载体上扩散速度较慢；另外，目前固定化细胞培养的凝胶载体的常规制备方法是使用打孔器、无菌刀片和移液枪头手工制备凝胶载体，其制备步骤繁琐，且对操作的精度和无菌需求较高。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种结构简单，设计合理的一种固定化培养凝胶载体的制备装置及其方法和应用。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

一种固定化培养凝胶载体的制备装置，包括与呈皿状结构的片剂制备模具及设于片剂制备模具上的若干制模柱体、呈皿状结构的片剂切割装置及设于片剂切割磨具上的若干第一切割内筒、呈皿状结构的顶盖切割装置及设于顶盖切割装置上的若干第二切割内筒；其中，所述片剂制备模具和所述片剂切割装置的对应位置均设置有限位柱。

进一步改进在于，所述制模柱体的直径与所述第二切割筒体的内径相同，所述第一切割筒体大于所述第二切割筒体的内径。

一种利用上述凝胶载体制备装置制备固定化培养凝胶载体的方法，包括以下步骤：

(1)配制60mL含3mmol/L的MgSO₄·7H₂O的0.75％植物凝胶，121℃灭菌20min；

(2)将40mL所述植物凝胶倒入90mm培养皿进行固化，并用片剂制备模具代替皿盖进行固化，固化结束后移除所述片剂制备模具，使所述制模柱体在固化的所述植物凝胶上形成预留孔，备用；将20mL所述植物凝胶倒入90mm培养皿中固化备用；