[发明专利]一种固定化培养凝胶载体的制备装置及其方法和应用

权利要求书

1.一种固定化培养凝胶载体的制备装置，其特征在于：包括呈皿状结构的片剂制备模具(1)及设于片剂制备模具(1)上的若干制模柱体(11)、呈皿状结构的片剂切割装置(2)及设于片剂切割磨具(2)上的若干第一切割内筒(21)、呈皿状结构的顶盖切割装置(3)及设于顶盖切割装置(3)上的若干第二切割内筒(31)；其中，所述片剂制备模具(1)和所述片剂切割装置(2)的对应位置均设置有限位柱(4)。

2.根据权利要求1所述的一种固定化培养凝胶载体的制备装置，其特征在于：所述制模柱体(11)的直径与所述第二切割筒体(31)的内径相同，所述第一切割筒体(21)大于所述第二切割筒体(31)的内径。

3.一种利用权利要求1所述凝胶载体制备装置制备固定化培养凝胶载体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)配制60mL含3mmol/L的MgSO₄·7H₂O的0.75％植物凝胶，121℃灭菌20min；

(2)将40mL所述植物凝胶倒入90mm培养皿进行固化，并用所述片剂制备模具(1)代替皿盖进行固化，固化结束后移除所述片剂制备模具(1)，使所述制模柱体(11)在固化的所述植物凝胶上形成预留孔，备用；将20mL所述植物凝胶倒入90mm培养皿中固化备用；

(3)使用片剂切割装置(2)对已固化且移除片剂制备模具(1)的40mL所述植物凝胶进行切割，获得片状载体底部，使用顶盖切割装置(3)对已固化的20mL的所述植物凝胶进行切割，获得圆柱状的凝胶片状载体顶盖；

(4)所述片状载体底部和片状载体顶盖组合形成固定化培养凝胶载体。

4.根据权利要求3所述的一种利用固定化培养装置制备固定化培养凝胶载体的方法，其特征在于：所述凝胶载体制备装置为不锈钢材质通过使用3D打印技术制成，且在进行凝胶制备前将所述凝胶载体制备装置用耐高温灭菌袋密封，通过121℃高温高压灭菌20min，灭菌完成后，置于60℃烘箱中保温。

5.一种丛枝菌根真菌非共生固定化培养方法，其特征在于，使用权利要求3所述的凝胶载体，包括以下步骤：

(1)用手术刀与镊子分别将所述片状载体底部从片剂切割装置里转移到6孔细胞培养板中，将片状载体顶盖从顶盖切割装置里转移到90mm培养皿中备用；

(2)用移液器接种无菌孢子至所述片状载体底部的预留孔中，用手术刀与镊子将片状载体顶盖镶嵌到含丛枝菌根真菌孢子的片状载体底部上，向细胞培养板的每个孔中缓缓倒入丛枝菌根真菌非共生液体培养基直至没过含有孢子的固定化培养凝胶载体，形成丛枝菌根真菌非共生固定化培养体系；

(3)将所述丛枝菌根真菌非共生固定化培养体系置于恒温培养箱中暗培养，培养温度为25℃，在培养期间，液体培养基每月更换一次。

6.根据权利要求5所述的一种丛枝菌根真菌非共生固定化培养方法，其特征在于：步骤2中非共生液体培养基每升配方如下：

MgSO₄·7H₂O:731mg；KNO₃:80mg；KCl:65mg；KH₂PO₄:4.8mg；Ca(NO₃)·4H₂O:288mg；Fe(Ⅲ)-EDTA:8mg；MnCl₂·4H₂O:3mg；ZnSO₄·7H₂O:1.3mg；H₃BO₃:1.5mg；CuSO₄·5H₂O:0.065mg；Na₂MoO₄·2H₂O:0.0012mg；KI:0.75mg；MES:2130mg；蔗糖:1g；葡萄糖:1g；甘氨酸:3mg；盐酸吡哆醇(VB6):0.1mg；烟酸:0.5mg；肌醇:50mg；盐酸硫胺素(VB1):10mg；豆蔻酸钾:0.5mmol。