[发明专利]一种Treg细胞制备方法以及在自身免疫性疾病方面的应用

说明书

本发明涉及一种Treg细胞制备方法以及在自身免疫性疾病方面的应用，本发明还提供一种PDE9A单克隆抗体，该抗体能够促进Treg细胞的增殖及提高其活性，增殖的Treg细胞具有较好的治疗免疫相关疾病的效果。

技术领域

本发明涉及生物领域，更具体的涉及一种Treg细胞制备方法以及在自身免疫性疾病方面的应用。

背景技术

调节性T细胞(Regulatory cells,简称Tregs )是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，早期亦称做suppressor T cells。调节性T细胞可分为天然产生的自然调节性T细胞（n T-regs）和诱导产生的适应性调节性T细胞(a T-regs或i T-regs)，如Th3、Tr1，另外尚有CD8 Treg、NKT细胞等，与自身免疫性疾病的发生关系密切，其异常表达可导致自身免疫性疾病。

调节性T细胞（Regulatory T cells）是维持机体免疫耐受的重要因素之一，它由胸腺产生后输出至外周，并通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖，从而调节机体的免疫力，如防止自身免疫性疾病的发生。CD4* CD25’/FOXP3*细胞的数量减少或功能异常均有可能导致自身免疫病的发生，一些自身免疫性疾病如多发性硬化症、活动性类风湿关节炎、I型糖尿病等调节性T细胞的数量和功能均会发生变化。在许多恶性疾病如肺、胰腺和乳腺癌等已经发现调节性T细胞明显增高。调节性T细胞也阻断抗肿瘤免疫反应从而导致死亡率上升，也可用于骨髓移植术前术后的跟踪。

自身免疫性疾病(autoimmunediseases，AID)是机体因免疫功能紊乱对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织、器官、系统损伤所致的一类疾病，包括自身免疫性肝病(AILD)、自身免疫性甲状腺病、自身免疫性溶血性贫血、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、多发性脑脊髓硬化症、重症肌无力、硬皮病、混合性结缔组织病等多种疾病。AID发病机制不明确，临床表现和诊断方法各异，多种细胞因子参与发病，但以效应T细胞参与的免疫反应更为显著，且肾上腺皮质激素治疗和/或免疫抑制剂治疗AID有一定疗效。T细胞除了Th1、Th2亚群外，还包括Th17和Treg两个新亚群，Th17细胞的主要效应因子IL-17有促炎效应，而Treg细胞分泌IL-4、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)等具有免疫抑制作用且两者在AID中的作用成为近年来的研究热点。

Treg细胞是Th1、Th2、Th17之外的T细胞亚群，具有免疫调节功能，能够分泌IL-4、IL-10和TGF-β等细胞因子，在免疫稳态和诱导免疫耐受中发挥重要作用。Treg细胞可分为天然型调节T细胞(nTreg)和诱导型调节T细胞(iTreg)两类;nTreg由胸腺细胞分化发育而来;iTreg由外周成熟T细胞受到特异性抗原刺激并在细胞因子的诱导下分化而来。Treg通过多种机制发挥免疫抑制作用，如产生抑制性细胞因子、破坏靶向T细胞的代谢、细胞溶解和调节树突状细胞的分化和功能。转录因子叉头盒P3(Foxp3)参与Treg细胞的分化并特异性高表达，是目前最特异的Treg细胞标志物。转录激活子STAT5是参与Treg细胞分化与存活的另一重要因素。

Treg细胞在免疫平衡中扮演的角色。在最严重的Treg缺乏症中，IPEX（免疫调节，多内分泌病，肠病，X连锁）综合征最为突出，关键Treg谱系特异性转录因子FOXP3（叉头盒P3）中的突变导致Treg缺陷，导致致命的多器官炎症和自身免疫。重要的是，Tregs的数量和/或功能的减少与许多常见自身免疫疾病的病理学有关。实际上，在一些疾病环境中，Treg功能缺陷或Treg生长和存活因子如白细胞介素-2（IL-2）的减少，再加部组织环境中高浓度炎性细胞因子如IL-6，IL-12，IL-1的产生让Treg不稳定，从而导致不受控制的炎症和过度的组织损伤。