[发明专利]YH66_01475蛋白及其编码基因在调控细菌精氨酸产量中的应用

说明书

本发明公开了YH66_01475蛋白及其编码基因在调控细菌精氨酸产量中的应用。本发明公开的YH66_01475突变体是将YH66_01475蛋白质第32位氨基酸残基由精氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质。本发明首先通过对YH66_01475基因进行单点突变得到YH66_01475^C94T，然后通过对构建的YH66_01475或突变基因的过表达重组菌以及YH66_01475敲除重组菌进行发酵培养发现，YH66_01475基因或其突变基因可以调控细菌L‑精氨酸产量。本发明首次发现YH66_01475基因参与精氨酸的生物合成，对于培育高产、高质量菌种，以及精氨酸工业化生产具有重大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及YH66_01475蛋白及其编码基因在调控细菌精氨酸产量中的应用。

背景技术

L-精氨酸是人体和动物的一种半必需氨基酸，具有重要的生化和生理学意义，因此被广泛应用于食品和医药工业中，尤其在医药工业领域，其作为提高人体免疫力，防治心血管疾病等治疗用药已受到人们的关注。

随着L-精氨酸的市场需求不断增加，选育高产、稳定的生产菌种，促进L-精氨酸在微生物体内的积累，进一步提高L-精氨酸的产量一直是L-精氨酸发酵工业技术开发和发酵工程化研究的热点，并且也将一直伴随L-精氨酸发酵工业的发展，对于促进L-精氨酸产业化的进程具有重要的意义。

棒杆菌属(Corynebacterium)微生物通过环形步骤途径实现L-精氨酸的生物合成，L-精氨酸从L-谷氨酸经由N-乙酰谷氨酸(N-acetylglutamate)、N-乙酰谷氨酰磷酸(N-acetylglutamyl phosphate)、N-乙酰谷氨酸半醛(N-acetylglutamate semialdehyde)、N-乙酰鸟氨酸(N-acetylornithine)、鸟氨酸(ornithine)、瓜氨酸(citrulline)以及精氨琥珀酸(argininosuccinate)而合成。

目前发酵法生产L-精氨酸常采用的棒杆菌属微生物有谷氨酸棒杆菌，但由于谷氨酸棒杆菌受到细胞内精氨酸的反馈抑制，从而使其在L-精氨酸产量方面存在局限。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何提高精氨酸产量。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了一种YH66_01475突变体。

本发明提供的YH66_01475突变体是将YH66_01475蛋白质第32位氨基酸残基由精氨酸突变为其他氨基酸残基得到的蛋白质；

所述YH66_01475蛋白质为如下A1)-A3)中的任一种：

A1)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

A2)将A1)所示的氨基酸序列经过除第32位氨基酸残基以外的一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与细菌产精氨酸相关的蛋白质；

A3)来源于细菌且与A1)或A2)具有95％以上同一性且与细菌产精氨酸相关的蛋白质。

上述A2)所述的蛋白质中，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述A3)所述的蛋白质中，这里使用的术语“同一性”指与天然氨基酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有95％或更高，或96％或更高，或97％或更高，或98％或更高，或99％或更高同一性的氨基酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述A1)或A2)或A3)所述的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。