[发明专利]表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法

说明书

本发明公开了表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法。表达载体过表达CCL17，淋巴瘤细胞包含过表达CCL17的表达载体，利用过表达CCL17的淋巴瘤细胞植入小鼠体内构建得到了小鼠淋巴瘤模型。并采用流式分析方法进行流式染色分析和RNA层面分析，结果表明构建的小鼠淋巴瘤模型显示肿瘤部位NK细胞增多，CCL17趋化NK细胞至肿瘤部位发挥肿瘤杀伤作用。

技术领域

本申请属于医药生物工程技术领域，具体涉及表达载体、淋巴瘤细胞、小鼠淋巴瘤模型及其构建方法。

背景技术

霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)是一种少见的起源于B淋巴细胞的肿瘤，其特点是肿瘤微环境中霍奇金细胞和Hodgkin Reed-Stemberg(HRS)细胞少，抑制性免疫细胞丰富。HRS是经典型的霍奇金淋巴瘤(cHL)中唯一且罕见的始发恶性细胞，只占1～2％，但形成了一个独特的强大的免疫抑制微环境。然而，驱动这种独特的HL微环境形成的关键因素仍不清楚。通过探索CCL17/22-CCR4轴的具体作用可以为了解HL微环境的形成机制及探索新的治疗措施奠定基础。

趋化因子作为一类小分子细胞因子/信号蛋白家族，可介导细胞独特的趋化作用。许多类型的肿瘤细胞具有独特的趋化因子表达谱，其中HL的HRS细胞特异性表达CCR4的配体CCL17(TARC)和CCL22(MDC)。已有研究表明CCL17的高水平表达在cHL中是特异性的，因为它在结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)或非霍奇金淋巴瘤(NHL)中不表达。CCL22在HRS细胞中表达水平相对较低，可存在于NLPHL和其他B细胞型NHL，特异性较差。而CCR4在HL微环境中的主要细胞群，如M2巨噬细胞、CD24+常规树突状细胞(cDC)、调节性T细胞(Treg)、CTLA4+CD274+CD4+功能障碍T细胞亚群中高表达。CCL17/22通过与CCR4受体结合，招募CCR4+细胞至肿瘤微环境中。同时这些CCR4+细胞类型还能旺盛地产生CCL17和/或CCL22，可能存在正反馈环路导致独特的HL微环境的演变。

大部分的霍奇金淋巴瘤患者通过规范化疗可以达到完全缓解，治愈率达到90％以上，但仍有20％-30％的患者会出现复发和/或对治疗无反应，这是需要探索解决的问题。同时在cHL患者中，血清CCL17和CCL22水平升高，与更高的疾病阶段、B-症状、庞大的肿瘤体积及治疗反应相关，可能成为预测治疗反应，及时调整治疗方案的有力预测标志物。

发明内容

有鉴于此，一方面，一些实施例公开了表达载体，该表达载体过表达CCL17。

一些实施例公开的表达载体，将CCL17的cDNA序列过表达于慢病毒载体，得到表达载体。

一些实施例公开的表达载体，该表达载体表达CCL17、mcherry和嘌呤毒素抗性基因。

另一方面，一些实施例公开了淋巴瘤细胞，该淋巴瘤细胞包含过表达CCL17的表达载体。

一些实施例公开的淋巴瘤细胞，将过表达CCL17的表达载体稳定整合到淋巴瘤细胞中，得到稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞。

一些实施例公开的淋巴瘤细胞，将表达载体稳定整合到淋巴瘤细胞中的方法包括同源重组、CRISPA/Cas9、TALEN、转染或病毒感染中的任意一种组合。

再一方面，一些实施例公开了小鼠淋巴瘤模型，包含稳定表达CCL17的淋巴瘤细胞。

又一方面，一些实施例公开了小鼠淋巴瘤模型的构建方法，将过表达CCL17的淋巴瘤细胞植入小鼠体内，得到小鼠淋巴瘤模型。

一些实施例公开的小鼠淋巴瘤模型的构建方法，将淋巴瘤细胞植入小鼠腹股沟皮下，得到小鼠淋巴瘤模型。

一些实施例公开的小鼠淋巴瘤模型的构建方法，小鼠为经过辐照破坏免疫的6W龄裸鼠。