[发明专利]基于Pep42构建的双特异性细胞接合器分子的制备及其应用

说明书

本发明提供了一种双特异性细胞接合器分子。具体地，本发明提供了一种双特异性细胞接合器分子，其包括靶向Pep42受体的第一结合结构域、连接段和抗人CD3分子的第二结合结构域，通过配体段连接肿瘤细胞，同时抗CD3抗体段连接T淋巴细胞，从而有效将效应性免疫细胞与肿瘤细胞结合，使T细胞靶向并杀死肿瘤细胞，具有在抗肿瘤药物制备中应用的潜力。

技术领域

本发明涉及生物医药领域。具体地说，本发明涉及双特异性单链抗体的制备及其应用。

背景技术

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在癌症治疗的免疫应答过程中起着关键作用。由于肿瘤细胞可通过自身分泌的相关细胞因子或与肿瘤微环境的相互作用营造出免疫抑制性环境，使肿瘤微环境中的CTL细胞功能失调。调节免疫细胞的一个策略就是利用双特异性细胞接合器使免疫细胞激活并杀死靶细胞，如肿瘤细胞。双特异性细胞接合器中有一类名为双特异性T细胞接合器(BispecificT-cell Engager,BiTE),因其一端特异性抗T细胞表达的抗原而得名，可引导T细胞杀死靶细胞，这个过程伴随着T细胞和靶肿瘤细胞之间形成瞬时的溶细胞突触形成，随后T细胞增殖和激活导致肿瘤细胞裂解。

双特异性细胞接合器分子由两种结合不同靶蛋白的蛋白或多肽序列(抗体最为常见)连接而成。

葡萄糖调节蛋白78(GRP78)又称Bip蛋白，由HSPA5基因编码，是内质网未折叠蛋白反应的关键分子。内质网应激是细胞应对内质网蛋白积累产生的一种应答形式，可诱发未折叠蛋白反应(UPR)，即细胞通过减少蛋白质合成，促进蛋白质降解，增加内质网分子伴侣表达等方式缓解内质网压力，内质网应激持续时间过长或过强，超过细胞自身未折叠蛋白反应的调节能力，将会引起细胞代谢紊乱和凋亡等。肿瘤微环境中，由于缺氧、葡萄糖饥饿和酸中毒等不利因素的存在常引起内质网应激反应，肿瘤细胞通过激活未折叠蛋白反应来适应这些不利条件，避免死亡。在内质网应激下，GRP78可大量表达并促进蛋白质正确折叠，缓解内质网压力，具有极强的抗细胞凋亡能力。已证实GRP78在肺癌、肝癌、结直肠癌等多种实体瘤细胞中表达上调，并部分转移到细胞膜表面参与PI3K/AKT和JAK2/STAT3等信号通路的激活调控。GRP78细胞膜转移的特性在正常细胞中很少见，提示csGRP78可作为肿瘤治疗靶点，具有很好的特异性和安全性。但目前没有针对GRP78为靶点的双特异性细胞接合器分子。

因此，本领域需要开发一种以GRP78为靶点双特异性细胞接合器分子。

发明内容

本发明的目的就是提供一种以GRP78为靶点的双特异性细胞接合器分子。

在本发明的第一方面，提供了一种细胞接合器分子，所述细胞接合器分子包括：

(a)第一结合结构域，所述第一结合结构域特异性结合Pep42受体，并且所述第一结合结构域具有环肽结构；和

(b)第二结合结构域，所述第二结合结构域特异性结合CD3。

在另一优选例中，所述的细胞接合器分子为双特异性细胞接合器分子。

在另一优选例中，所述的环肽结构是来源于小分子环肽Pep42的环肽结构。

在另一优选例中，所述的Pep42受体为Grp78。

在另一优选例中，所述的第一结合结构域来源于Pep42配体肽段，所述Pep42配体肽段具有SEQ ID NO.2(CTVALPGGYVRVC)所示的序列。

在另一优选例中，所述的第一结合结构域氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在另一优选例中，所述的第一结合结构域通过第1位Cys与第13位Cys间的二硫键形成环肽结构。

在另一优选例中，所述的第二结合结构域特异性结合人CD3。