[发明专利]检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法。所述引物对组合的核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.24所示；避免了传统Real‑time PCR技术一次只能实现一个目的，需要进行多次扩增和检测才能覆盖样本中的多个靶标转基因成分，避免了现有技术在进行多重PCR时，出现较多的假阳性和假阴性结果，可以通过一次高通量测序和分析，进行9个以上的多重PCR反应，无需每组引物单独检测，因此大大提高了检测效率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法。

背景技术

棉花(Gossypium hirsutumL.)是我国重要的经济作物之一，其种植、加工、纺织等相关从业人员众多，对农村经济的发展和农民的经济收入具有非常重要的影响，是关系国计民生的重要战略物资。长期以来，以杂交育种为主的传统育种技术在提高棉花产量、纤维品质以及抗逆性等方面取得了一定进展，并获得了可观的社会效益和经济效益。现代生物技术尤其植物基因工程的迅速发展为棉花种质资源创新提供了新的思路和方法，它可以打破物种间的生殖隔离，通过直接或间接的转移手段有目的、有计划地向棉花体内引入控制性状遗传的优良基因，在无需改变原有特性的条件下，打破基因不良连锁，实现生物性状的定向改变。利用转基因技术手段提高棉花产量、改良纤维品质以及增强抗虫、抗病和抗逆性，是常规育种的重要补充。随着社会对转基因产品安全性问题的日益关注，农产品中的转基因成分检测已纳入国内外检验检疫部门的检测项目并逐渐得到加强。因此，开发高效、便捷的转基因食品检测技术显得至关重要。

转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。目前基于核酸的PCR检测方法仍是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、荧光定量PCR多重PCR等方法。相对于普通定性PCR方法，巢式PCR高了检测的灵敏度，容易造成假阳性。LAMP操作简单、特异性强，然而引物设计较为复杂，容易造成DNA污染，影响后续的实验。荧光定量PCR方法具有重复性好、灵敏度高、核酸交叉污染少的优点，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。普通的多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但一般不超过六重，否则引物之间干扰较大，影响检测效果。基因芯片和数字PCR技术也是常用的转基因产品检测技术，它们均具有高通量、灵敏度高、特异性强等优点，且可平行检测1个转基因作物中多个基因或同时检测多种转基因作物；然而其成本高昂，需要专门的仪器设备，要求操作人员具有较高的专业素质，这些因素限制了该技术在检测中的广泛应用。

因此，研发一种高效、灵敏和鉴定的转基因产品检测方法十分重要。

发明内容

本申请提供了一种检测棉花转基因品系的引物对组合、试剂盒及检测方法，以解决如何高效快速鉴定棉花转基因品系的技术问题。

第一方面，本申请提供了一种检测棉花转基因品系的引物对组合，所述引物对组合包括

特异性扩增MON15985a的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示；

特异性扩增MON1445的引物对，包括2对引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3至SEQID NO.6所示；

特异性扩增MON88913的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示；

特异性扩增GHB614的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9至SEQ ID NO.10所示；

特异性扩增LLcotton25的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.12所示；

特异性扩增DAS-24236-5的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13至SEQ IDNO.14所示；