[发明专利]一种检测玉米转基因品系的引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测玉米转基因品系的引物组，其特征在于，所述引物组包括29对检测引物对，29对所述检测引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1~SEQIDNO.58所示；

所述引物对中各引物的长度都为18bp~30bp。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括2对扩增引物对，2对所述扩增引物对包括ZmGMO30和ZmGMO31，2对所述扩增引物对的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.59~SEQIDNO.62所示，用于扩增玉米内参基因zSSIIb。

3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述检测引物对用于检测20种玉米转基因品系，20种所述玉米转基因品系为MON863、NK603、MON88017、BT11、MON810、T25、Bt176、MIR604、3272、LY038、MON89034、MON87460、BVLA430101、MIR162、DAS-40278-9、DAS-59122、shuangkang12-5、IE09S034、DP-098140-6和Bt10。

4.一种检测玉米转基因品系的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-3任一项所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括多重PCR预混液。

6.一种准确检测玉米转基因品系的试剂盒的应用，其特征在于，所述应用包括：将如权利要求4或权利要求5所述的试剂盒用于检测转基因玉米及玉米衍生产品中。

7.一种检测玉米转基因品系的方法，其特征在于，所述方法包括：

分别得到玉米转基因品系和玉米内参基因的核苷酸序列；

根据所述玉米转基因品系和所述玉米内参基因的核苷酸序列，分别设计出如权利要求1-3任一项所述的引物组；

提取待测样品的基因组DNA，得到待测玉米样品的基因组DNA；

以所述基因组DNA为模板，以所述引物组为扩增引物进行扩增反应，得到扩增产物；

将所述扩增产物进行高通量测序，得到高通量测序数据；

将所述高通量测序数据进行分析，确定待测玉米样品是否含有转基因品系。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述将所述扩增产物进行高通量测序，得到高通量测序数据，具体包括：

将所述扩增产物进行高通量测序文库的构建，得到高通量测序文库；

得到所述高通量测序文库的实际浓度；

根据高通量测序文库的所述实际浓度和高通量测序文库说明书上标准浓度的大小，判断所述高通量测序文库是否合格；

若所述实际浓度＞标准浓度，则将所述高通量测序文库进行测序。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述扩增体系包括：先94℃预变性15min，后进行第一扩增反应和第二扩增反应，其中，所述第一扩增反应包括10个降落循环，所述降落循环的目标温度为0.8℃。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述第一扩增反应包括：94℃变性20s，65℃～57℃退火并延伸60s，10个降落循环；

所述第二扩增反应包括：94℃变性20s，57℃退火并延伸60s。