[发明专利]穿心莲抗炎和抗病毒的活性成分筛选方法

说明书

本发明公开了穿心莲抗炎和抗病毒的活性成分筛选方法，将穿心莲总提液与环氧合酶‑2、白细胞介素‑6和血管紧张素转化酶2混匀后进行孵育，通过超滤膜洗脱，再加入有机溶剂释放生物活性分子后超速离心，收集滤液得到配体溶液，冷冻干燥后加入溶剂进行仪器分析鉴定筛选得到穿心莲中的多靶标活性配体；构建了穿心莲抗炎、抗病毒活性成分与多靶标酶相互作用的关联性，有利于阐明穿心莲发挥疗效的潜在作用机制；且本发明实施例的方法简单、准确、高效，能够保持生物靶分子与药物小分子的天然构象以及两者之间的亲和作用，适用于天然药物或细菌发酵液等复杂体系中活性成分或先导化合物的高通量筛选和快速鉴定。

技术领域

本发明涉及天然药物技术领域，具体涉及穿心莲抗炎和抗病毒的活性成分筛选方法。

背景技术

穿心莲为爵床科穿心莲属植物，穿心莲的干燥地上部分味苦、性寒，有清热燥湿和泻火解毒之功效，被誉为“天然抗生素”。民间常用于感冒发热、咽喉肿痛、痈肿疮疡和毒蛇咬伤等症。现代药理学研究表明，穿心莲具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、降糖、保护心血管、保肝和抑制血小板聚集等作用。

相关技术中，从穿心莲中分离、鉴定得到的化学成分包括二萜内酯类、黄酮类、环烯醚萜类、苯丙素类和生物碱等成分，而其中的特异活性成分并不明确，可发挥抗炎和抗病毒活性的穿心莲的药效物质基础及组分间的协同效应同样不明确。

发明内容

有鉴于此，本发明的实施例提供了一种可定向筛选出穿心莲有效发挥抗炎和抗病毒活性成分的方法。

本发明的实施例提供了穿心莲抗炎和抗病毒的活性成分筛选方法，将穿心莲总提液与环氧合酶-2、白细胞介素-6和血管紧张素转化酶2混匀后进行孵育，通过超滤膜洗脱，再加入有机溶剂释放生物活性分子后超速离心，收集滤液得到配体溶液，冷冻干燥后加入溶剂进行仪器分析鉴定筛选得到穿心莲中的多靶标活性配体。

进一步地，所述穿心莲抗炎和抗病毒的活性成分筛选方法，包括以下步骤：

(1)配制酶促缓冲溶液；

(2)配制穿心莲样品溶液；

(3)穿心莲样品溶液与多靶标酶亲和反应筛选活性成分。

进一步地，所述步骤(1)中，分别量取77.4mL、22.6mL浓度均为1mol/L的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，使用去离子水溶解至总体积为1L，充分混合后得到pH值7.4浓度0.1mol/L的磷酸钠酶促缓冲溶液；

进一步地，所述步骤(2)中，称取穿心莲药材100g，采用12倍量85％乙醇回流提取2次，每次2h，提取液合并，过滤后减压浓缩，冷冻干燥得到总提物，再称取适量总提物，使用酶促缓冲溶液充分溶解，得20mg/mL的穿心莲样品溶液；

进一步地，所述步骤(3)中，取适量穿心莲样品溶液和环氧合酶-2、白细胞介素-6、血管紧张素转化酶2充分混匀后置于37℃恒温振荡培养箱中孵育，孵育后的混合液通过超滤膜洗脱分离，向截留配体的超滤管中加入溶剂室温下静置，离心分离得到滤液，将滤液冷冻干燥后加入溶剂溶解得到与环氧合酶-2、白细胞介素-6、血管紧张素转化酶2结合的活性成分溶液，将所述活性成分溶液进行液相色谱-质谱仪器分析鉴定，得到穿心莲中抗炎和抗病毒活性成分；另取等量失活环氧合酶-2、白细胞介素-6、血管紧张素转化酶2与穿心莲样品溶液进行相同步骤的对照组实验。