[发明专利]一种TiO2

说明书

本发明提供了一种TiOsubgt;2/subgt;缺陷调控的DNA甲基化光电检测方法，包括：S1，以ZnO纳米棒阵列电极为模板，在同时含锌和钛的前驱体溶液中多次液相沉积得到锌掺杂的表面氧空位浓度可控的TiOsubgt;2‑x/subgt;纳米管阵列电极；S2，以EDAC为偶联剂，苯并三氮唑为反应中间体，使二羟基苯甲酸和一端修饰氨基的捕获探针ssDNA发生反应形成酰胺键得ssDNA‑PCA分子；S3，将TiOsubgt;2‑x/subgt;纳米管阵列电极浸入ssDNA‑PCA分子的溶液中，室温下组装反应，形成ssDNA‑PCA/TiOsubgt;2‑x/subgt;纳米管阵列电极；S4，将DNA甲基化样品变性，加入亚硫酸氢钠对DNA甲基化样品进行前处理；S5，将ssDNA‑PCA/TiOsubgt;2‑x/subgt;纳米管阵列电极浸入DNA甲基化样品溶液中，在室温下杂交，得到满单层组装的5mC‑DNA‑PCA/TiOsubgt;2‑x/subgt;纳米管阵列电极；以该电极为工作电极，进行暂态光电流测试。该方法简单、快速和灵敏。

技术领域

本发明涉及一种TiO₂缺陷调控的DNA甲基化光电检测方法，属于DNA甲基化检测技术领域。

背景技术

DNA甲基化是哺乳动物生长和发育过程中不可缺少的表观遗传修饰之一，其参与多种生理过程，包括基因印记、基因沉默、X染色体失活、疾病的发生等。在哺乳动物中，DNA的甲基化反应主要是指DNA的两个核苷酸CG中的胞嘧啶在DNA甲基转移酶的催化作用下被选择性地添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶(5mC)。众多研究表明，细胞DNA甲基化的异常状态与肿瘤的发生、发展密切相关。

近些年来，随着DNA甲基化研究的不断深入，出现了各种各样的DNA甲基化检测方法。然而由于5-甲基胞嘧啶上甲基基团很小，DNA甲基化检测的研究难度较大，早期开发的检测方法都存在着一定的缺陷。因此，研究工作者研发出各种各样的新型检测方法，如PCR法、荧光法、单分子实时测序法、质谱法、电化学方法等。

光电化学检测方法是近几年建立起来的一种利用物质的光电转换特性进行检测的新型分析方法，它具有设备简单、灵敏度高、易于微型化等特点，可以应用于DNA甲基化检测。光电化学检测方法应用于DNA甲基化检测时，由于DNA甲基修饰本身很难产生独特的光电化学信号，需借助通过嵌入或标记的形式引入可提供光电响应的信号源，例如嵌入剂、半导体纳米粒子等，更多的方法需要同时辅助甲基转移酶的作用实现检测DNA甲基化的检测。其操作繁琐，不够简单和快速。

因此，开发简单、快速、灵敏的DNA甲基化检测方法仍是目前亟需解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种TiO₂缺陷调控的DNA甲基化光电检测方法，可以有效解决上述问题。

本发明是这样实现的：

一种TiO₂缺陷调控的DNA甲基化光电检测方法，包括以下步骤：

S1，以ZnO纳米棒阵列电极为模板，在同时含锌和钛的前驱体溶液中多次液相沉积得到锌掺杂的表面氧空位浓度可控的TiO_2-x纳米管阵列电极；

S2，以EDAC(碳二亚胺)为偶联剂，苯并三氮唑(Bt)为反应中间体，使二羟基苯甲酸(PCA)和一端修饰氨基的捕获探针ssDNA发生反应形成酰胺键得ssDNA-PCA分子；

S3，将TiO_2-x纳米管阵列电极浸入已经制备好的ssDNA-PCA分子的溶液中，室温下进行组装反应，形成ssDNA-PCA/TiO_2-x纳米管阵列电极；

S4，将DNA甲基化样品变性，加入亚硫酸氢钠对DNA甲基化样品进行前处理；