[发明专利]前列腺癌/乳腺癌骨转移小分子标志物及临床检测试剂盒

权利要求书

1.小分子标志物IL-8或S100A4在制备前列腺癌、乳腺癌骨转移检测试剂中的应用。

2.IL-8/S100A4磁性抗体的制备方法，包括：

1）取羧基磁珠用pH=6.0 的MES缓冲液清洗后，将磁珠复悬于pH=6.0 的MES缓冲液至磁珠浓度为100mg/ml；

2）将EDC-MES缓冲液 和 Sulfo-NHS-MES缓冲液加入到步骤1）得到的磁珠中混匀，调至磁珠浓度为50 mg/ml，25℃下活化30分钟；

3）去活化好的磁珠上清液，加入pH=6.0 的MES缓冲液清洗，再取浓度为2mg/ml的IL-8或S100A4抗体加入到活化清洗后的磁珠中，立即混匀，25℃反应12-18小时；

4）反应结束后，磁珠去上清，加入pH=7.4的PBS缓冲液和Tween20清洗并保持磁珠在缓冲液中的终浓度为10mg/ml，25℃混匀30分钟；

5）去上清，并复悬于含0.1%Tween20+0.1%BSA的10mM pH=7.4的PBS缓冲液，调至磁珠终浓度为10mg/ml，抗体浓度为200μg/ml，得到IL-8/S100A4磁性抗体。

3.IL-8/S100A4的HRP免疫检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的制备方法制备得到的IL-8/S100A4磁性抗体、辣根过氧化物酶HRP标记抗体、发光底物和Tris洗涤缓冲液，所述发光底物由鲁米诺、过氧化氢以及增强剂对2碘苯酚组成，所述IL-8/S100A4磁性抗体的抗体浓度为200μg/ml，辣根过氧化物酶HRP标记抗体的抗体浓度为100μg/ml。

4.根据权利要求3所述的IL-8/S100A4的HRP免疫检测试剂盒，其特征在于，所述Tris洗涤缓冲液中包含200mM Tris，200mM NaCl，0.2% w/v TritonX-100，0.3% BND，0.1% 硅油型消泡剂，HCl调节pH至7.6。

5.根据权利要求3所述的IL-8/S100A4的HRP免疫检测试剂盒，其特征在于，包括待测品稀释液，所述待测品稀释液中包含10mM pH=7.4的PBS缓冲液、0.1% Tween20 和0.1% BSA。

6.IL-8/S100A4的ALP免疫检测试剂盒，其特征在于，包括IL-8/S100A4磁性抗体和碱性磷酸酶ALP标记抗体，所述IL-8/S100A4磁性抗体的抗体浓度为200μg/ml，碱性磷酸酶ALP标记抗体的抗体浓度为100μg/ml。

7.根据权利要求6所述的IL-8/S100A4的ALP免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括化学发光剂AMPPD和Tris洗涤缓冲液。

8.根据权利要求7所述的IL-8/S100A4的ALP免疫检测试剂盒，其特征在于，所述Tris洗涤缓冲液中包含200mM Tris，200mM NaCl，0.5% w/v TritonX-100，0.3% BND，0.1% 硅油型消泡剂，HCl调节pH至7.6。

9.根据权利要求7所述的IL-8/S100A4的ALP免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括待测品稀释液，所述待测品稀释液中包含10mM pH=7.4的PBS缓冲液、0.1% Tween20 和0.1%BSA。