[发明专利]一种抗鸡TLR15蛋白的多克隆抗体及制备方法

说明书

本发明提供了一种抗鸡TLR15蛋白多克隆抗体及其制备方法，包括鸡TLR15蛋白的抗原性分析、筛选用于制备抗体的肽段对应基因序列、密码子优化及基因合成、原核表达及免疫。鸡Toll样受体15（chTLR15）是一种禽类特有的细胞表面模式识别受体，介导的先天性免疫反应对禽类抵御细菌以及病毒入侵具有重要作用，但由于其商业化抗体的缺乏，其配体和激活机制不清。本发明通过分析chTLR15蛋白的抗原性，密码子优化及基因合成和原核表达，获得重组蛋白His‑chTLR15，制备了具有高度特异性的抗chTLR15蛋白多克隆抗体，为研究chTLR15在家禽免疫方面作用提供重要支撑。

技术领域

本发明涉及一种抗鸡TLR15蛋白多克隆抗体及其制备技术领域，特别是涉及一种鸡TLR15（Toll-like receptors 15，TLR15）部分基因片段的选择、密码子优化及合成，重组质粒的构建，重组蛋白表达、纯化，多克隆抗体的制备及特异性检测。

背景技术

chTLR15是鸡TLRs家族中特有的先天免疫受体蛋白。chTLR15以同源二聚体形式存在，具有抵抗细菌入侵、激活机体抗病毒能力。chTLR15属于Ⅰ型跨膜糖蛋白，是禽类体内一类重要的模式识别受体，广泛存在于心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑及胸腺等组织中，其中在法氏囊中mRNA转录水平最高，其次是脾脏与盲肠。chTLR15的激活涉及受体胞外域的蛋白水解切割与NF-κB依赖性基因转录的刺激，且chTLR15可识别病毒非甲基化CpG-DNA序列，激活机体抗病毒能力。

目前chTLR15的研究集中在chTLR15介导的先天性免疫反应对禽类抵御细菌以及病毒入侵的研究；通过高效识别病毒肽聚糖，激活并产生IL-1β炎性因子；chTLR15相关信号通路对宿主抗感染免疫应答的研究。

人、大鼠、小鼠、兔子等哺乳动物以及家禽，果蝇的TLRs已鉴定并证实，但TLR15为鸡特有的先天免疫受体蛋白，对chTLR15研究尚不深入，尤其是还未出现商业化鸡TLR15多克隆抗体。

在本次发明中，根据NCBI公布的鸡TLR15序列，分析其抗原性，选定76-681bp基因序列（长606bp）所编码的第25-227 aa（长202aa）作为抗原，对76-681bp基因序列进行密码子优化后，合成基因片段，利用原核表达系统表达pET30-chTRL15，通过纯化浓缩chTRL15重组蛋白制备兔抗TLR15血清多抗。本发明填补了缺乏商品化chTLR15抗体的空白，为TLR15在家禽方面的研究提供了基础资料。

发明内容

本发明克服了抗鸡TLR15蛋白多克隆抗体制备技术的缺陷，提供一种编码鸡TLR15蛋白片段的核苷酸序列优化序列、重组蛋白表达及纯化、多克隆抗体制备及抗体特异性检测方法。

本发明的目的是提供一种抗鸡TLR15蛋白的多克隆抗体，以解决现有技术中针对鸡TLR15蛋白缺少特异性抗体的问题。

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一种抗鸡TLR15蛋白多克隆抗体，其特征在于，所述多克隆抗体由经重组质粒pET30a-chTLR15编码表达的重组蛋白经生物免疫制得，所述重组质粒pET30a-chTLR15中TLR15基因序列为SEQ ID NO.3所示，由SEQ ID NO.1核苷酸序列经密码子优化而来，该序列长606bp，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，该序列编码202个氨基酸（第25-227位），分子量预测为22kDa，等电点为5.74，预测融合His标签后蛋白分子量为27kDa。

本发明进一步公开了抗鸡TLR15蛋白多克隆抗体制备方法包括以下步骤：

步骤一：鸡TLR15抗原性分析、密码子优化及基因片段的合成；

步骤二：构建原核表达载体pET30a-chTLR15；

步骤三：使用重组质粒对感受态大肠杆菌进行转化，制备工程菌；

步骤四：诱导工程菌进行重组蛋白的表达，并进行纯化；