[发明专利]一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒

说明书

本发明公开了一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒，本发明将鼠抗人cTnI单克隆抗体经稀释、生物素标记后进行裸磁珠包被，获得鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠；稀释浓度为0.1mg/mL～0.6mg/mL；采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体，制备获得两种鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，将两种磁珠混合用于制备用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。本发明制备的试剂盒灵敏度高、准确度高、且稳定性好。

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，具体涉及一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。

背景技术

cTnI属于心肌肌钙蛋白的复合物亚单位，主要存在于心肌细胞。心力衰竭时心肌细胞在缺血、缺氧情况下，出现心肌细胞凋亡、心室肌肉重构、心室腔扩大、内皮细胞功能紊乱，导致心肌细胞的完整性遭到破坏，细胞膜通透性增加，cTnI释放入血，导致血液中cTnI水平明显升高。cTnI水平在心肌损伤发生后3h～4h内开始升高，10h～24h内达到峰值，是反映心肌损伤及坏死的特异性血清学标志物，是血清学中诊断心肌损伤的“金标准”，心肌缺血、缺氧、损伤情况越严重，患者的cTnI水平往往越高。cTnI的检测对于急性冠状动脉综合征的预后，急性心肌梗死的诊断、动态检测及疗效观察，不稳定心绞痛预后判断，溶栓治疗效果的评估等均有较大的临床价值，具有非常关键的临床意义。

近年来，心肌肌钙蛋白检测技术的一大进步就是高敏心肌肌钙蛋白的出现。所谓高敏心肌肌钙蛋白，就是其检测下限较传统的心肌肌钙蛋白更低，能检测出极低水平的心肌肌钙蛋白。高敏心肌肌钙蛋白(cTnI)免疫分析在3h-4h之内即可作出诊断，在急性心肌梗死病程中真正做到了早诊断早治疗，为降低心肌梗死，挽救病人的生命赢得宝贵的时间。

目前临床上对cTnI进行检测的常用方法有酶联免疫吸附实验(ELISA)、胶体金免疫层析技术、电化学发光等免疫诊断技术，由于方法学及抗体配对的限制，胶体金免疫层析技术法的灵敏度及检测定量准确度很难达到要求，ELISA法耗时较长，步骤较多，电化学发光法灵敏度和准确度都较高，但是费用高，多数市场被西门子罗氏等国外试剂占据，不适用于基层医院。另外，一些检测产品多采用某一段抗原表位的抗体对抗原进行检测，普遍存在漏检和无法达到正常人检出率≥50％。因此，筛选能够在识别cTnI的同时又能防止误检的抗体配对，发明一种灵敏度高，快速的检测试剂盒，及时监测病情的发展趋势、满足检测不同时间患者血液中心肌肌钙蛋白含量变化的要求尤为重要。

发明内容

基于上述技术背景，本发明提供了解决上述问题的一种鼠单抗包被的磁珠、制备方法及测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒，旨在获得一种高灵敏度、准确度和稳定性、且费用较低的hs-cTnI免疫测定试剂。

本发明通过下述技术方案实现：

一种鼠单抗包被的磁珠，为混合磁珠，所述混合磁珠采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，用于制备测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。

本发明优选采用的两种抗体为：抗体1：特异性结合cTnI的第41-49位氨基酸片段；抗体2：特异性结合cTnI的第86-92位氨基酸片段。

一种鼠单抗包被的磁珠的制备方法，包括以下步骤：将鼠抗人cTnI单克隆抗体经稀释、生物素标记后进行裸磁珠包被，获得鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠；稀释浓度为0.1mg/mL～0.6mg/mL；采用两种针对不同cTnI抗原表位的鼠抗人cTnI单克隆抗体，制备获得两种鼠抗人cTnI单克隆抗体包被的磁珠，将两种磁珠混合用于制备用于测定高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ的试剂盒。