[发明专利]胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法

说明书

本发明提供了从食品种检测色氨酸的方法，它包括使用化合物7a对待检样品进行荧光滴定，排除Ag⁺干扰后，即可得到色氨酸含量。

技术领域

本发明涉及检测领域。

背景技术

氨基酸作为蛋白质与多肽的基本结构单元，是人体生长不可或缺的营养物质，同时在维持 新陈代谢、调节神经系统以及免疫反应等生理过程中具有至关重要的作用。因此，任何一种氨 基酸及其代谢物的缺失或者过量都将影响人体健康。已知基本氨基酸有二十种，其中色氨酸是 人类和动物体内重要的必需氨基酸之一，因其具有调节肠道菌群、参与细胞免疫等功能，在食 品、医药、生化等领域得到广泛的应用。根据世界卫生组织(WHO)规定，机体内色氨酸正常 水平应控制在4mg/kg，然而一旦摄入过量，便会导致妄想和幻觉障碍，从而增加精神分裂症 和神经性疾病的风险。除此之外，内源性色氨酸也是肝细胞疾病诊断的重要信号因子。因此， 色氨酸的快速检测及分离在生命科学研究和食品营养分析中越来越受到人们的关注。

目前，色氨酸的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法、毛细管电泳、电化学法等，然而这些方法不仅依赖大型精密仪器与专业技术人员，且操作繁琐、耗时长，严重阻碍了检测的效率。近年来，基于分子识别形成的氨基酸特异性受体的种类逐年被大量报 道。Lu课题组报道了新颖的杯芳烃衍生物，通过紫外-可见光谱和荧光光谱在DMF-乙腈体系 中实现对左旋色氨酸的识别；张艳以香豆素为原料合成了香豆素衍生物荧光探针，并将其成 功用于活细胞内色氨酸的含量检测。牛建丽等采用溶剂热法合成了发光性能和水溶性良好的 纳米探针，建立了基于该纳米探针内滤效应测定色氨酸含量的方法，并将其应用于酱油中色 氨酸的检测。胆甾类化合物因其具有刚性的凹面，是构筑人工受体的理想结构单元，本研究 拟以胆甾类化合物为隔离基，连接芳环为手臂形成刚性钳形结构，用于氨基酸的识别研究， 并建立快速检测色氨酸的新方法。

发明内容

本发明以脱氧胆酸为原料合成了一种胆甾类手性分子钳7a，考察了其对多种氨基酸荧光 光谱变化的影响，发现该手性分子钳7a在Ethanol/Tris(1∶1,v/v,pH 7.0)缓冲液中 对色氨酸具有特异性识别能力，检出限低至0.17μmol/L，同时考察了化合物7a对色氨酸识别过程中常见金属阳离子及阴离子的干扰行为，在排除阴阳离子干扰作用基础上，建立了 快速测定食品样品中色氨酸的新方法。

具体的是，本发明提供了从食品种检测色氨酸的方法，其特征在于：它包括使用化合物7a对 待检样品进行荧光滴定，排除Ag⁺干扰后，即可得到色氨酸含量；化合物7a结构式如下：

色氨酸含量m＝m₁-(m₂/M_Ag+)×M_色氨酸；m1为未排除Ag⁺干扰的待检样品的色氨酸含量，m2 为待检样品中的Ag⁺含量，M_色氨酸＝204.23g/mol,M_Ag+＝107.87g/mol。

其中，荧光检测中，主要以约270nm为发射波长，在约268nm波长处测量其荧光强度。

其中，m₁的测定方法包括：

(1)样品预处理：取待检样品，乙醇超声提取，再加入碱，水解；水解液上离子交换树 脂，采用氨水洗脱，收集氨水洗脱液；

(2)通过荧光分光光度计进行检测，并通过标准曲线计算m₁。

其中，乙醇体积分数选自30～50％。

其中，洗脱用氨水体积分数为1～2％。