[发明专利]一种检测鸡金银羽位点基因型的引物对、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测鸡金银羽位点基因型的引物对、试剂盒及检测方法，属于动物遗传育种和生物技术领域。本发明针对导致银羽表型的SLC45A2基因突变设计了引物对，并在下游引物引入了一个错配碱基，该错配碱基结合基因本身的突变能够形成BspHI酶切位点，从而使该引物能用于PCR‑RFLP分析。通过以待判定基因型的鸡的基因组DNA为模板用该引物对进行PCR扩增，然后对PCR产物酶切、琼脂糖凝胶电泳检测，即可根据电泳结果判定鸡金银羽位点(即上述SLC45A2基因突变位点)的基因型。与PCR‑SSCP和PCR产物直接测序的方法相比，本发明建立的方法操作简单、成本低、周期短，大大提高了鸡金银羽位点基因型判定的准确性,不需要特殊的仪器,易推广普及。

技术领域

本发明涉及动物遗传育种和生物技术领域，尤其涉及一种检测鸡金银羽位点基因型的引物对，包含该引物对的试剂盒，以及利用该试剂盒检测鸡金银羽位点基因型的方法。

背景技术

初生雏鸡的雌雄鉴别在养鸡生产中有着重要的意义。在肉鸡生产中雏鸡出壳时鉴别雌雄有利于公母分养，便于根据公母不同的生长发育速度、营养需求给予不同的饲料和饲养管理条件，避免公雏发育快而抢食，影响母雏发育；在商品蛋鸡生产中雏鸡出壳时即淘汰公雏可节省饲养公雏的空间和成本，提高母鸡的成活率和整齐度；对于种鸡可通过鉴别雌雄、只出售不同品系单一性别的雏鸡以保护育种成果。

雏鸡的性别鉴定方法大体分为两类：一类根据雌雄雏鸡的生殖器官的差异，通过对生殖突起或性腺的直接观察来鉴定，包括器械鉴别法、翻肛鉴别法等；另一类利用鸡性连锁基因的伴性交叉遗传现象，使用带有特定伴性基因基因型的品种或品系进行杂交生产自别雌雄配套系，通过杂交后代雏鸡绒羽的颜色、浅色斑块的大小或不同的羽毛生长速度来鉴别雏鸡性别。自别雌雄方法相对直接观察法(如翻肛法，器械鉴别法)具有鉴别速度快，准确率高，不需要对鉴别人员进行专门的技术培训，对雏鸡损伤小，交叉感染疾病的可能性小的优点。目前在自别雌雄配套系生产中应用的伴性基因有快慢羽基因、金银羽基因和横斑基因。在利用这些基因的自别雌雄方法中，利用金银羽基因自别雌雄可直接通过雏鸡绒羽颜色区分雌雄，更为简单直观，没有时间的限制，而且准确率更高，具有更好的利用价值。利用金银羽基因进行自别雌雄时，使用金羽公鸡与银羽母鸡交配，所生后代公雏绒羽为白色，母雏绒羽为红色。目前金银羽自别雌雄配套系已广泛应用于源自洛岛红、洛岛白遗传背景的蛋鸡配套系中(包括海兰褐、伊莎褐、大午金凤等)。但在应用金银羽表型进行性别鉴定的配套系的建立过程中银羽亲本需要有银羽纯合公鸡和银羽纯合母鸡来保持，而对于银羽公鸡而言可能存在两种基因型，即银羽纯合(SS)和银羽杂合(Ss)，只有淘汰掉银羽杂合公鸡才能形成稳定的配套系亲本，对于一些遗传背景不够清晰的家鸡遗传资源，若应用金银羽表型建立自别雌雄的配套系，从白羽鸡群体中筛选出携带银羽基因的个体，并建立起银羽基因位点纯合的银羽品系是建立应用金银羽自别雌雄的配套系的前提和基础。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供了一种检测鸡金银羽位点基因型的引物对，包含该引物对的试剂盒，以及利用该试剂盒检测鸡金银羽位点基因型的方法。利用本发明提供的引物对、试剂盒以及检测方法，能够快速鉴定出鸡只的金银羽位点基因型，操作简单，成本低，周期短，并大大提高了该位点基因型判定的准确性。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种检测鸡金银羽位点基因型的引物对，包括由SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；其中，SEQ ID NO.1的序列为：5′-CTTAAGTCACTCTTGAAGACTCTTTTAAGC-3′；SEQ ID NO.2的序列为：5′-CCGTGAAGAAGAGCATGTTGGTCA-3′。