[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌，该菌种于2021年11月19日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC No. 23944。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）出发菌株活化，将出发菌株在LB培养基中摇瓶培养得到菌体，然后将菌体用生理盐水调整菌悬液活菌数为10⁷-10⁸ CFU/mL；

（2）紫外诱变，取倒有菌悬液的培养皿放在紫外灯下进行诱变，然后用无菌生理盐水将诱变后的菌悬液稀释100倍，均匀涂布于固体培养基中进行培养；

（3）复筛，对致死率在70-80%的菌株进行复筛，复筛时挑选菌落大、边缘不整齐、镜检为革兰氏阳性菌、细胞形态成短杆状的单菌落进行酶活力验证，得目标菌株。

3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤（1）出发菌株活化中药瓶培养的条件为37℃、200r/min的摇床上振荡培养，达到对数期，将培养好的菌液4000r/min条件下离心10min，得到菌体。

4.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于：所述步骤（2）紫外诱变中的诱变条件为在紫外灯下方30cm处，照射3min。

5.权利要求1所述的草芽孢杆菌在制备D-阿洛酮糖中的应用。

6.一种利用权利要求1所述的草芽孢杆菌制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤a取枯草芽孢杆菌的菌体发酵液离心取沉淀，沉淀用缓冲试剂重悬；

步骤b取重悬后菌液用高压均质机连续均质3次，进行离心，上清液经0.45μm滤膜过滤即为粗酶制剂；

步骤c将步骤b制得的粗酶制剂与D-果糖溶液混合转化、离心，得到D-阿洛酮糖粗液；

步骤d将步骤c制得的阿洛酮糖粗液经脱色过滤、离子交换、真空浓缩、色谱分离、浓缩、结晶、干燥后，制得晶体阿洛酮糖。

7.根据权利要求6所述的制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于：所述步骤a中菌体发酵液的制备过程为包括，步骤A，取枯草芽孢杆菌XGSC-001接种于LB固体培养基中，在37℃的条件下，活化培养13h，制得活化菌株；

步骤B，取步骤A制得的活化菌株，接种于种子培养基中，在37℃的条件下，扩增培养14h，制取种子液；

步骤C取，将步骤B制得的种子液，按体积比3%的比例接种于发酵培养基中，在37℃下培养10h，即可得菌体发酵液。

8.根据权利要求6所述的制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于：所述步骤a中洗涤菌体采用试剂为pH7.5、浓度50 mmol/L的Tris-HCl缓冲液。

9.根据权利要求7所述的制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于：所述步骤B种子培养基组分按重量百分比为包括蛋白胨1%，酵母浸粉0.5%，氯化钠1%，余量水；pH 7.0。

10.根据权利要求7所述的制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于：所述步骤C中发酵培养基组分按重量百分比为包括葡萄糖1.5%，酵母浸粉2%，蛋白胨1%，氯化钠0.8%，七水硫酸镁0.1%，磷酸氢二钠0.1%，硫酸锰0.001%，余量水；pH 7.0。