[发明专利]斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒

说明书

本发明涉及分子生物学技术对物种种质鉴定的定性检测方法，具体说是斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒。斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）和SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）所示碱基。该方法利用一对引物在遗传雄性个体中扩增出635bp和925bp两个相差290bp的DNA片段，在遗传雌性个体中仅扩增出635bp的单一DNA片段，并可以通过琼脂糖凝胶电泳分辨，缩短了准确鉴定斑石鲷遗传性别的时间，提升了性别检测效率。在斑石鲷性别鉴定、高雄苗种制备和家系选育上具有重要的意义和应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术对物种种质鉴定的定性检测方法，具体说是斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及鉴定方法和试剂盒。

背景技术

斑石鲷隶属于鲈形目（Perciformes），石鲷科（Oplegnathidae），石鲷属（Oplegnathus），主要分布于西太平洋温热带海域，喜栖息于10-100m水深的岩礁、砂砾、贝藻丛生的海区，为恋礁性底栖鱼类；幼鱼具有在夏、秋季随着海藻漂移生态习性。肉食性，齿锐利，可咬碎贝类或海胆等坚硬的外壳（孟庆闻等，1995）。斑石鲷皮下含有丰富的胶原蛋白、多种氨基酸及不饱和脂肪酸，口感独特，在日本料理中具有“刺身绝品”之誉；另外，斑石鲷体态优美，鱼身光泽银纹与黑褐色斑点结合，被人们称之为“梦幻之鱼”，受垂钓爱好者及消费者的青睐，是一种具有较高食用和观赏价值的海产鱼类（高小强等，2018）。目前人工繁育的斑石鲷市场销售价格达到了200元/斤，同时由于斑石鲷具有摄食贝壳食性特点，可以清理养殖网箱网衣，节约了人力资源和网衣清理成本，经济效益和生态效益极其显著。斑石鲷又是我国本土自然种类，其资源开发及可持续利用具长效性，养殖前景广阔。

斑石鲷雌鱼染色体核型为2n=48，含有46条端着丝粒染色体和1对亚中部着丝粒染色体，遗传性别类型为（X₁X₁X₂X₂）；雄鱼染色体核型为2n=47，含有44条端着丝粒染色体和1对亚中部着丝粒染色体以及1条巨大的异形染色体，遗传性别类型为（X₁X₂Y）（薛蕊等，2016）。石鲷科鱼类在养殖过程中存在显著的雌雄生长二态性，雄鱼生长速度快于雌鱼，斑石鲷高雄苗种和全雄苗种的制备将促进斑石鲷养殖产业的提质增效，开展斑石鲷苗种遗传性别快速鉴定技术的研发将有助于斑石鲷优良雄性种质的储备（肖志忠，2015）。由于斑石鲷生殖周期较长（3~4年），在幼鱼和成鱼时期无法通过外部形态特征对斑石鲷性别进行准确鉴定，而在斑石鲷人工繁育和人工选育构建家系过程中都需要选择优质雌雄亲鱼并实现性别的精确鉴定，因此，建立斑石鲷雌、雄遗传性别快速鉴定方法是实现斑石鲷高雄苗种制备，提升斑石鲷遗传育种进程和优质苗种规模化生产的重要手段。

目前已报道的斑石鲷雌、雄遗传性别的鉴定采用的是“三体法”即三条引物联合扩增分析，由于该方法采用的三条引物的退火温度不同，造成目的条带扩增效率不一致、扩增产物不稳定；同时该方法设计的遗传雄性个体特异性目的条带大小为222个碱基（bp），极易同PCR扩增过程中的产生引物二聚体（10~250bp）混淆；另外由于该方法中雄性个体另外两条目的条带仅相差12个碱基（bp），导致在常规琼脂糖凝胶电泳上两条目的带的区分度差。因此，挖掘斑石鲷新的遗传性别特异分子标记，建立斑石鲷雌雄遗传性别高效、快捷鉴定的分子技术成为斑石鲷人工选育和养殖产业亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明的目的在于一种斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记及其快速鉴定的方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种斑石鲷雌雄遗传性别的特异性标记，斑石鲷雌鱼与雄鱼染色体的特异性标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1（Xfm ID Nm:1）和SEQ ID NO:2（Ym ID Nm:1）所示碱基。