[发明专利]一种多瘤种结合核酸适配体及其肿瘤检测中的应用

说明书

本发明公开了一种多瘤种结合核酸适配体及其肿瘤检测中的应用，核酸适配体，为一段长度为40bp的核苷酸序列，SYL‑6序列（SEQ ID）：1，5’‑CTAGGAGTGGTTATAAGGCGTAGGGGAAGGCGGGTCCA GG‑3’，应用于制备肿瘤检测试剂中。本发明基于Cell‑SELEX技术，筛选获得多瘤种结合核酸适配体，为多种癌症的早期诊断和治疗奠定一定的技术基础，也为不同类型的肿瘤提供一种普适的早期诊断分子识别工具，后续可制备为通用肿瘤检测试剂，一种试剂能检测多种类型的肿瘤，为肿瘤检测的便利化和低成本化提供可能。

技术领域

本发明属于癌症的生物医学诊治技术领域，具体涉及一种多瘤种结合核酸适配体及其肿瘤检测中的应用。

背景技术

近年来,癌症的发病率逐年增加,是导致人类死亡的主要原因之一，对人类健康和生命构成极大威胁。然而癌症早期的体征和症状不明显，各种肿瘤标志物也较少，难以实现早期诊断，因此，筛选具有高灵敏度的分子识别探针对各种癌症的早期诊断、转移和疗效评估等具有很重要的意义。

核酸适配体是一段能够高特异性、高亲和力结合靶标的单链DNA或RNA，由体外指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选获得，核酸适配体具有易合成、成本低、低毒性、穿透性强及修饰可控且化学稳定性好等优势，且易于与各种材料偶联，为各种癌症的特异识别、早期诊断、病理分型，肿瘤靶向治疗等提供了非常有效的方法。例如，将核酸适配体与荧光基团、放射性同位素等指示剂偶联后，可用于肿瘤细胞的成像与检测，从而用于提示肿瘤类型和病变程度等信息。

目前，针对单一瘤种的核酸适配体已有了较多报道，但是能够结合多种肿瘤细胞的核酸适配体鲜有报道，为此，我们提出一种多瘤种结合核酸适配体及其肿瘤检测中的应用，为不同类型的肿瘤提供一种普适的早期诊断分子识别工具。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种多瘤种结合核酸适配体及其肿瘤检测中的应用，筛选获得多瘤种结合核酸适配体，为多种癌症的早期诊断和治疗奠定一定的技术基础，可以有效解决背景技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种多瘤种结合核酸适配体，为一段长度为40bp的核苷酸序列，具体如下：

SYL-6序列（SEQ ID）：

5’-CTAGGAGTGGTTATAAGGCGTAGGGGAAGGCGGGTCCAGG-3’。

一种多瘤种结合核酸适配体的筛选方法，包括以下步骤：

步骤一 文库的构建及相关引物设计

筛选所用文库为单链DNA文库，每条单链DNA总长度为80nt，中间为40nt的随机序列，5’端与3’端各有20nt的引物序列，每条DNA单链可表示为：

5’-ATGAGAGCGTCGGTGTGGTA-40nt-TGTAGGAGGGTGCGGAAGTA-3’；

文库制备过程中，所有DNA单链正向引物的5’端均带有FAM染料，以便后续使用流式细胞仪测定结合情况，可表示为：

5’-FAM-ATGAGAGCGTCGGTGTGGTA-3’；

所有DNA单链反向引物的5’端均带有生物素标记，以便于通过链霉亲和素修饰的琼脂糖微珠分离正义链与反义链，从而用于后续筛选，可表示为：

5’-Biotin-TACTTCCGCACCCTCCTACA-3’；

文库构建及引物合成均由生工生物技术有限公司(中国上海)完成和提供；

步骤二 Cell-SELEX筛选