[发明专利]一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法

说明书

本发明属于食品加工技术领域，且公开了一种绿叶蔬菜食品加工用α‑淀粉酶制剂的高效纯化方法，食品加工用α‑淀粉酶制剂的智能化在线高效纯化主要包括有以下步骤：S1.发酵液培养：将提取的地衣芽孢杆菌以及HY‑3菌株接种到种子培养基的摇瓶内进行20‑24h培养，2％接种量接种至发酵培养基，并设定培养基环境温度为36‑39℃，培养32‑38h。本发明通过将纯化步骤输入系统，不仅可以提高各实验步骤的运行效率，从而有效缩短整个实验期间对时间的消耗，而且运行系统进行实验可以有效避免线下实验带来的安全隐患，同时运行线上系统进行实验可以方便对实验参数进行调节，减少实验误差，提高实验精确性，而且可以便于重复实验，从而进一步提高纯化效率。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体为一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法。

背景技术

食品加工指直接以农、林、牧、渔业产品为原料进行的谷物磨制、饲料加工、植物油和制糖加工、屠宰及肉类加工、水产品加工，以及蔬菜、水果和坚果等食品的加工活动，是广义农产品加工业的一种类型；近年，我国农副食品加工业有了较快的发展，已成为具有较强发展潜力的产业；而食品加工用的淀粉酶制剂是直链淀粉消化酶的旧称，其主体直链淀粉(amy l oce)的水解酶称为淀粉酶(amy l a－ce)；现在这名称往往用于从植物(如麦芽)和微生物(如曲霉)所获得的粗酶制剂，也就是说多用于各种多糖、蛋白质、核酸、脂肪分解的混合物。

目前，α-淀粉酶制剂的利用领域非常广泛，主要包括工业生产、食品加工、饲料制备以及医药科技研究等领域，而不同领域对于α-淀粉酶制剂的纯度要求也有所区别，而尽管现有的α-淀粉酶制剂纯化方法很多，且均能够达到符合某需求的纯化效果，但由于现有的α-淀粉酶制剂纯化操作均是由线下实验进行，这样不仅实验效率极低而且实验中的危险隐患以及实验误差均难以避免，而且操作步骤更为繁琐等，因此需要研发一种食品加工用α-淀粉酶制剂的线上高效纯化方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，食品加工用α-淀粉酶制剂的智能化在线高效纯化主要包括有以下步骤：

S1.发酵液培养：将提取的地衣芽孢杆菌以及HY-3菌株接种到种子培养基的摇瓶内进行20-24h培养，2％接种量接种至发酵培养基，并设定培养基环境温度为36-39℃，培养32-38h；

S2.酶液制备：将上述获取的发酵液在8000r/min状态下离心20分钟，并收集上清液即为粗酶液；

S3.固液分离：将上述粗酶液经离心、过滤得到菌体(胞内酶)和液体(胞外酶)；

S4.纯化提取：再将上述菌体(胞内酶)进行内细胞进行破碎得到混合液，最后将处理后的菌体混合液至于5000-6500r/min环境下离心20min得到液体(胞外酶)，该操作相较于现有技术中对于α-淀粉酶制剂的纯化有提高酶液利用率以及酶液纯度的效果，从而不仅使实验人员能够获取更多的胞外酶，从而提高实验对试剂原料的利用率；

S5.盐析：将S3和S4中获取的(胞外酶)液体分装至三只相同的烧杯中，每支20ml，然后加入硫酸铵至上述三只烧杯中，并使其饱和度分别为40％、60％和80％；

S6.脱盐浓缩：将上述沉淀用0.2mol/LpH6.8PBS缓冲液回溶处理，再将其移入透析袋中，经透析膜袋在20倍量0.02mol/L磷酸缓冲液中进行36h透析脱盐。

优选的，在酶的分离纯化过程中S1-S4均需要测定酶的活力以及体积，以便于准确计算酶的总活力和比活力，通过对总活力和比活力的测算可以有利于计算酶活力的回收率以及纯化倍数，以便于监测S1-S4中酶的回收和纯化效果。