[发明专利]一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法

权利要求书

1.一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：食品加工用α-淀粉酶制剂的智能化在线高效纯化主要包括有以下步骤：

S1.发酵液培养：将提取的地衣芽孢杆菌以及HY-3菌株接种到种子培养基的摇瓶内进行20-24h培养，2％接种量接种至发酵培养基，并设定培养基环境温度为36-39℃，培养32-38h；

S2.酶液制备：将上述获取的发酵液在8000r/min状态下离心20分钟，并收集上清液即为粗酶液；

S3.固液分离：将上述粗酶液经离心、过滤得到菌体(胞内酶)和液体(胞外酶)；

S4.纯化提取：再将上述菌体(胞内酶)进行内细胞进行破碎得到混合液，最后将处理后的菌体混合液至于5000-6500r/min环境下离心20min得到液体(胞外酶)；

S5.盐析：将S3和S4中获取的(胞外酶)液体分装至三只相同的烧杯中，每支20ml，然后加入硫酸铵至上述三只烧杯中，并使其饱和度分别为40％、60％和80％；

S6.脱盐浓缩：将上述沉淀用0.2mol/LpH6.8PBS缓冲液回溶处理，再将其移入透析袋中，经透析膜袋在20倍量0.02mol/L磷酸缓冲液中进行36h透析脱盐。

2.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：在酶的分离纯化过程中S1-S4均需要测定酶的活力以及体积，以便于准确计算酶的总活力和比活力。

3.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：S1中发酵培养基至于150-180r/min的离心机内培养。

4.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：S3中对粗酶液进行离心、过滤的具体操作为：首先将S2中获取的粗酶液在5000r/min的离心状态下处理15-20min，再将离心液进行初步过滤；然后将滤液至于3000r/min的离心状态下处理10-15min，最后再利用目数更低的滤网进行过滤即可。

5.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：S5中需要缓慢加入硫酸铵，而且加注的同时需要不断地轻柔搅拌。

6.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：S5中制得的三杯混合液需要在25-30℃环境下静置2h，直至出现白色沉淀即可。

7.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：S6中进行36h透析脱盐(环境pH为7)时每过6h换一次透析液，取各梯度脱盐沉淀5ml并在6000r/min状态下离心20min，最后取其上清测酶活。

8.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：S6中透析袋使用前的处理包括有以下步骤：

a1.在250ml的玻璃烧杯中加入200ml透析袋处理液，并将其至于微波炉内预热；

a2.根据实际使用需要将通用透析袋裁剪成合适的尺寸，并将其至于上述预热后的烧杯内，再将烧杯至于电炉上煮沸持续10min；

a3.取出用蒸馏水洗净后，再用65-80℃蒸馏水蒸煮10min；

a4.冷却后即可使用，或至于pH为7的磷酸缓冲液中保存；

a5.最后扎紧透析袋一端，注入清水检查其密封性后再加注低于透析袋体积1/2的透析溶液即可。

9.根据权利要求1所述的一种绿叶蔬菜食品加工用α-淀粉酶制剂的高效纯化方法，其特征在于：将S1-S6操作步骤以及相关参数均输入计算机系统，需要对α-淀粉酶进行符合实际使用需求的纯度纯化时，运行上述S1-S6的步骤，并输入相关参数值，通过对系统的运行自动进行纯度循环提升，并将每次提升的数值与预期至进行对照，直至纯度达到预期值。