[发明专利]一种快速高效的DNA 5’侧翼序列克隆方法有效
| 申请号： | 202210033141.8 | 申请日： | 2022-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN114540341B | 公开（公告）日： | 2023-10-27 |
| 发明（设计）人： | 龚春梅;李佳阳;任洁洁;珠拉太;周文菲;唐磊;余有本;白娟;周杰;王文钊 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 高效 dna 侧翼 序列 克隆 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种快速高效的DNA 5’侧翼序列克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以待测样本为模板，使用LAD引物组分别与SP1引物进行热不对称PCR扩增；
所述LAD引物组至少需要4个LAD引物，且两两配对；
(2)将(1)中扩增产物为模板，使用AC1依次与其余SP引物进行热不对称PCR扩增；
所述SP引物组需要设计至少2个SP引物进行2组及以上扩增。
2.如权利要求1所述的快速高效的DNA 5’侧翼序列克隆方法，其特征在于，还包括特异性扩增条带的判断：步骤(2)中AC1与SP的扩增产物，若不同组合扩增出大小相同的条带，则一定为非特异扩增。
3.如权利要求1所述的快速高效的DNA 5’侧翼序列克隆方法，其特征在于，步骤(2)中，所述(1)中扩增产物为稀释10-50倍的扩增产物。
4.一种如权利要求1-3任一所述的侧翼序列克隆方法在制备侧翼序列克隆制剂中的应用。
5.一种侧翼序列克隆引物组，其特征在于，包括：即针对物种特异型设计的一系列SP引物组。
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