[发明专利]非整合慢病毒载体系统在基因编辑器递送中的应用

权利要求书

1.非整合慢病毒载体系统在制备碱基编辑器递送产品中的应用，所述非整合慢病毒载体系统转染宿主细胞后能获得非整合的慢病毒，所述非整合慢病毒载体系统包括表达碱基编辑器的重组慢病毒载体、表达整合酶的质粒和表达VSV囊膜G蛋白的质粒。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述整合酶是将HIV整合酶的第64位氨基酸由D(天冬氨酸)突变为V(缬氨酸)，保持HIV整合酶的其它氨基酸不变得到的蛋白质。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述碱基编辑器为CBE碱基编辑器、ABE碱基编辑器或PE碱基编辑器中的一种或几种；

所述CBE碱基编辑器由融合蛋白和定位系统组成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和胞嘧啶脱氨酶，所述定位系统为sgRNA；所述ABE碱基编辑器由融合蛋白和定位系统组成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和腺嘌呤脱氨酶，所述定位系统为sgRNA；所述PE碱基编辑器由融合蛋白和定位系统组成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和逆转录酶，所述定位系统为pegRNA。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于：所述Cas9n为具有单条链切割活性的突变体Cas9(D10A)或为具有单条链切割活性的突变体Cas9(H840A)。

5.递送碱基编辑器的非整合慢病毒载体的制备方法，包括下述步骤：

a)构建表达碱基编辑器的重组慢病毒载体；

b)将步骤a)的重组慢病毒载体与表达整合酶的质粒和表达VSV囊膜G蛋白的质粒转染宿主细胞，得到重组细胞，培养所述重组细胞；

c)收获步骤b)的培养物，从所述培养物中收集慢病毒载体颗粒，该慢病毒载体颗粒即为所述非整合慢病毒载体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：a)中所述碱基编辑器选自：CBE碱基编辑器、ABE碱基编辑器或PE碱基编辑器中的一种或几种，

所述CBE碱基编辑器由融合蛋白和定位系统组成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和胞嘧啶脱氨酶，所述定位系统为sgRNA；所述ABE碱基编辑器由融合蛋白和定位系统组成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和腺嘌呤脱氨酶，所述定位系统为sgRNA；所述PE碱基编辑器由融合蛋白和定位系统组成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和逆转录酶，所述定位系统为pegRNA。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：b)中所述宿主细胞为HEK293T细胞。

8.重组细胞，其特征在于：所述重组细胞含有权利要求1-4中任一项所述应用中的所述非整合慢病毒载体系统。

9.根据权利要求8所述的细胞，其特征在于：所述细胞选自下述C1)-C3)中任一种：

C1)真核细胞；

C2)酵母细胞、植物细胞或哺乳动物细胞；

C3)人细胞。

10.权利要求5-7中任一项所述方法获得的非整合慢病毒载体。