[发明专利]一种番鸭血浆源ACE抑制肽的酶法制备方法

说明书

本发明公开了一种番鸭血浆源ACE抑制肽的酶法制备方法，采用碱性蛋白酶酶解番鸭血浆制备ACE抑制肽，包括调节番鸭血浆初始pH至10‑11，60‑70℃恒温水浴10min，加入碱性蛋白酶，加酶量为2200‑2500 U/g，60‑70℃水浴进行酶解反应5‑6h，反应结束后调节pH至7，并于95℃水浴10min灭酶，10000‑12000 g、4℃、10min离心，取上清冻干得番鸭血浆源ACE抑制肽，测得ACE抑制率为65.46±1.15%。本发明方法提高了番鸭血经济价值，节约了资源。

技术领域

本发明涉及一种ACE抑制肽的制备方法，具体涉及一种番鸭血浆源ACE抑制肽的酶法制备方法。

背景技术

我国是肉鸭生产和消费大国，每年肉鸭的生产消费量占全球产销量70%以上。番鸭原产于南美洲，在我国主要分布于长江以南大部分地区，是优良的肉鸭品种，由于其瘦肉率高、肉质鲜美，深受越来越多消费者的喜爱和青睐。鸭血作为鸭肉制品加工产生的主要副产物之一，含有丰富的蛋白质，微量元素含量高，易于消化吸收，同时含有多种生物活性物质，营养组成丰富。但是由于血液蛋白具有强烈的颜色和味道，用于人类直接消费的数量有限，除部分用于做饲料外，其他未经恰当处理便排放到环境中，易造成环境污染。

高血压是常见的慢性病，也是影响心脑血管疾病的危险因素之一。ACE抑制肽是从体外摄取的功能性肽，可作为高血压药物治疗的补充或替代物，有助于预防或治疗心血管疾病，由于其直接或间接来源于食物蛋白，被认为比药物更安全，并且没有一些与药物相关的副作用。酶解法是合成ACE抑制肽最普遍的方法，该方法利用蛋白酶的特异性和高效性将蛋白水解为小分子肽段。该种方法制备的多肽稳定性好、安全性高，且制备效率高，但是蛋白酶的选择及酶解工艺参数（温度、pH、酶解时间等）对产物的影响较大。Food ResearchInternational（2018, 106: 589–597. DOI:10.1016/j.foodres.2018.01.030)公开Guo等使用海藻酸钠固定化的瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）LB 10蛋白酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽，发现在酶解8 h时，ACE抑制率最高达到43.00±1.50%，随着酶解时间增加，ACE抑制率反而下降。Food Chemistry（2017,220: 190–197. DOI:10.1016/j.foodchem.2016.09.183）公开Fan等使用9种单酶水解淘汰蛋鸡肌肉，结果表明胃蛋白酶酶解产物ACE抑制效果最好（IC50=23±0.9 µg/mL）。此外还有学者从海洋小球藻、大豆、罗非鱼、泥鳅和鸭肉]等中分离出多种具有ACE抑制作用的生物活性肽，但是禽血中鲜有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以提高番鸭血经济价值且节约资源的番鸭血浆源ACE抑制肽的酶法制备方法。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种番鸭血浆源ACE抑制肽的酶法制备方法，其步骤包括：

调节番鸭血浆初始pH至10-11，60-70℃恒温水浴10min，加入碱性蛋白酶，加酶量以番鸭血浆重量计为2200-2500 U/g， 酶解温度60-70℃，酶解反应时间5-6h，酶解反应过程每隔0.5h调节pH至初始，反应结束后调节pH至7，并于95℃水浴10min灭酶，灭酶后10000-12000 g、4℃、10min离心，取上清冻干得番鸭血浆源ACE抑制肽。

作为本发明的一种优选，所述的碱性蛋白酶的单位酶活为200 U/mg。

作为本发明的进一步优选，所述的酶解温度65℃，酶解反应时间5.85 h，加酶量2500 U/g 。

作为本发明的进一步优选，所述的调节番鸭血浆初始pH为10.5。