[发明专利]猪繁殖和呼吸障碍综合症病毒快速检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体，所述的单克隆抗体3的的重链可变区序列如SEQ ID NO.2所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.3所示；所述的单克隆抗体8的的重链可变区序列如SEQ ID NO.4所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.5所示；所述的单克隆抗体3结合的抗原表位位于优化后的PRRSV GP5蛋白的aa34‑aa48位；所述的单克隆抗体8的抗原表位位于优化后的PRRSV GP5蛋白的aa96‑aa109位。本发明还公开了一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的单克隆抗体3和单克隆抗体8以及配套的检测试剂。本发明制备的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性，适用于制备不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断试剂，如胶体金、ELISA、化学发光等检测试剂盒。

技术领域

本发明属于病毒疫病诊断技术领域，具体涉及猪繁殖和呼吸障碍综合症病毒快速检测试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

猪繁殖和呼吸障碍综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，简称PRRS)，俗称蓝耳病(Blue Ear Disease)，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的传染病。PRRS可导致母猪出现繁殖障碍及仔猪出现严重呼吸道疾病，是一种严重影响经济效益的猪传染病。

PRRSV为单股正链RNA(大小约15kb)，不分节段病毒，该病毒属动脉炎病毒科动脉炎病毒属。PRRSV是一种有囊膜的病毒，似球状，直径45～65nm，囊膜表面有纤突，相对平滑。PRRSV可在猪肺泡巨噬细胞上生长(PAM细胞)，在MARC-145细胞上培养可出现细胞圆缩、聚集和崩解等明显的细胞病变(CPE)。PRRSV的RNA其5‘端具有帽子结构(5‘-Cap)，3’端具有多聚腺嘌呤核苷酸尾结构(3’-polyA)，共含有9个开放阅读框(ORF)，分别为1a、1b、2a、2b、3、4、5、6、7。相邻ORF间有重叠区域。PRRSV的主要结构蛋白包括GP5蛋白(囊膜糖蛋白)、M蛋白(基质蛋白)、N蛋白(核衣壳蛋白)，次要结构蛋白则有GP2、GP3、GP4等。

GP5蛋白由ORF5编码，约26～30kD，是一个糖基化蛋白，含有4个糖基化位点，有6个抗原决定簇。有证据表明GP5在PRRSV的抗体识别过程中起关键作用，是诱导机体产生中和抗体的主要结构蛋白，是公认的PRRSV的主要保护性抗原，也是PRRSV诊断的靶标抗原之一。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一，提供一种PRRSV GP5蛋白的单克隆抗体及其制备方法；本发明的目的之二，提供了一种使用本发明制备的GP5蛋白和单克隆抗体制备猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒。

因此，本发明一方面公开了一种一种猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体，所述的单克隆抗体均能特异性结合PRRSV GP5蛋白；所述的单克隆抗体3的的重链可变区序列如SEQ ID NO.2所示，所述的单克隆抗体3的轻链可变区序列如SEQ ID NO.3所示；所述的单克隆抗体8的的重链可变区序列如SEQ ID NO.4所示，所述的单克隆抗体8的轻链可变区序列如SEQ ID NO.5所示。

优选地，本发明所述的单克隆抗体3结合的抗原表位位于优化后的PRRSV GP5蛋白的aa34-aa48位，所述的优化后的PRRSV GP5蛋白的aa34-aa48位氨基酸序列为ETFVIFPVLTHIVSY。

优选地，本发明所述的单克隆抗体8的抗原表位位于优化后的PRRSV GP5蛋白的aa96-aa109位，所述的优化后的PRRSV GP5蛋白的aa96-aa109位氨基酸序列为LAKNCMSWRYSCTR。

另一方面，本发明还公开了一种制备所述的单克隆抗体的方法，所述方法包括以下步骤：1)PRRSV GP5蛋白的制备；2)特异性表达抗PRRSV GP5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备；3)使用步骤2)制备的杂交瘤细胞制备小鼠腹水，从腹水中纯化抗PRRSV GP5蛋白单克隆抗体。