[发明专利]一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体m19、制备方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体、制备方法及应用。本发明以O型口蹄疫病毒146s作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，获得一株高效分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并获得了一种鼠单克隆抗体m19。间接免疫荧光试验表明所述单克隆抗体m19对O型不同谱系毒株均具有很好的反应性，而不和A型不同谱系毒株反应。利用单克隆抗体m19和O型结构蛋白兔抗血清建立了O型口蹄疫病毒结构蛋白固相竞争ELISA检测试剂盒，相较于现有抗体，显著提高了检测结果的灵敏度和特异性，适用于O型口蹄疫感染或灭活疫苗免疫后结构蛋白抗体的检测，同时，也是一种监测口蹄疫非免疫地区感染情况的新方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体m19、制备方法及应用。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的传染病。FMDV属于微核糖核酸病毒科(picornaviridae)口蹄疫病毒属(aphthavirus)的成员，目前有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病。

由于同一血清型内不同亚型的抗原性均有不同程度的差别，血清学交叉反应程度也各有不同，使得口蹄疫的诊断和控制存在很大的难度。单克隆抗体具有识别单一抗原位点的能力，与抗原结合特异性强，均质性高，生物活性单一，易于标准化，可批量生产的特点，广泛应用于生物医学领域中。目前，中国主要流行O型、Asial型和A型FMD，因此，研发O型口蹄疫病毒单克隆抗体对于该病的诊断和预防具有重要意义。

目前关于口蹄疫血清学检测方法有3种：病毒中和试验(VNT)、液相阻断ELISA(LPB-ELISA)、固相竞争ELISA(SPC-ELISA)，固相竞争ELISA方法除了具有液相阻断ELISA方法的传统优势外，其特异性更好，操作更为简单，2004年被OIE确立为口蹄疫血清学调查的最新推荐方法。但是，由于FMDV抗原结构复杂，开发广谱且特异性针对O型口蹄疫病毒抗体检测试剂盒，需要筛选到识别型内保守表位的特异性单克隆抗体，但目前针对O型口蹄疫病毒检测的特异性单克隆抗体稀少，这给建立广谱且特异性的O型FMDV抗体检测方法带来一定障碍。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体、制备方法及应用，具体包括以下内容：

第一方面，本发明提供了一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的单克隆抗体m19，所述单克隆抗体m19重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选地，所述单克隆抗体m19为IgG2b型单克隆抗体。

第二方面，本发明提供了一种编码上述第一方面所述单克隆抗体m19的基因片段，其特征在于，编码所述单克隆抗体m19重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述单克隆抗体m19轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

第三方面，本发明提供了一种含有上述第二方面所述的基因片段的表达载体。

第四方面，本发明提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述第三方面所述的表达载体，或其基因组中整合有上述第二方面所述的基因片段。

第五方面，本发明提供了一种免疫偶联物，所述免疫偶联物包括：

(i)上述第一方面所述的单克隆抗体m19；

(ii)和选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或VLP、或其组合。