[发明专利]一种生物偶联法制备褐藻糖胶的方法

说明书

本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种褐藻糖胶的提取方法及其应用。所示方法包括海带清洗、烘干、粉碎过筛,加入复合生物酶反应得到酶解液；将酶解液接入益生菌开展混菌发酵，将发酵液离心收集上清，通过钙沉除杂，梯度醇沉制备褐藻糖胶。本发明提供的褐藻糖胶提取方法,采用生物酶解和益生菌发酵偶联作用，通过生物酶解法裂解细胞壁释放内溶物，通过益生菌发酵将大分子降解成小分子，提取条件温和、能耗低、绿色环保，极大地提高了海藻的功效性能和产品价值。

技术领域

本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种褐藻糖胶的提取方法及其应用。

背景技术

海带是一种冷水性的大型经济藻类，是我国主要生产的藻类产品之一。海带不仅是一种营养成分丰富的海洋食蔬，营养丰富，富含多种矿物质，在工业和食品加工中具有极高的经济价值。同时其富含褐藻糖胶、褐藻胶、甘露醇、碘等经济成分也是医药保健、海藻化工和农业肥料等行业的重要原料。在过去的50年里，已经发现了3000多种从藻类中提取的产品，引起了人们的极大关注，并被认为是最有前途的抗癌活性物质。随着海洋天然产物的不断开发，褐藻糖胶在分离、纯化、制备、结构分析、生物活性和口服吸收等方面已成为研究热点。

褐藻糖胶无毒，很少引起刺激性反应，并且具有许多有益于治疗应用的生物活性如抗肿瘤、抗氧化、抗凝、抗血栓、免疫调节、抗病毒和抗炎等。褐藻糖胶的组成和结构取决于海藻种类、地理位置、收获季节和提取程序。褐藻糖胶的传统提取方法通常是通过热水浸提、酸提醇沉等，近年来新发展的提取方法有超声波、微波辅助提取法和酶辅助提取法等。不同的提取和纯化方法也可能影响褐藻糖胶的理化特性和生物活性，因此，选择合适的提取方法是从原料中分离岩藻糖胶的关键步骤，因为这会影响到所需生物活性褐藻糖胶的产量、组成、结构和完整性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过生物酶解和生物发酵偶联法提取海带中褐藻糖胶的方法。解决现有褐藻糖胶提取效率低，生产成本高，活性成分破坏大的问题。

本发明采用的技术方案如下：

一种通过生物偶联法提取海带中褐藻糖胶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）原料预处理：将海带浸泡清洗，去除杂质，烘干后，粉碎；

（2）生物酶解：将海带加水，盐酸调pH至4.8-5.0，加入酸性酶，在50℃下搅拌2h；将酶解液调pH至8.0-9.0，加入碱性酶，在60℃下再进行1.5小时的酶解反应；

（3）生物发酵：将步骤（2）中得到的酶解液灭菌，接入益生菌发酵，总接种量:10％。发酵条件为30℃，200r/min发酵；

（4）钙沉：发酵结束后，将发酵产物离心，加氯化钙过滤去沉淀，收集上清；

（5）梯度醇沉：将步骤（4）所得的上清浓缩至500ml离心除去沉淀，加至60%乙醇醇沉，离心去沉淀得褐藻糖胶粗品，加入200mL 4M氯化钙溶液，离心去沉淀。加入30%乙醇醇沉，离心去沉淀，加入60%乙醇醇沉，离心取沉淀烘干得褐藻糖胶。

优选的，步骤（1）中所述的原料粉碎的粒度为80-100目。

优选的，步骤（2）中所述的原料固液比为1:30。

优选的，步骤（2）中所述的海带的提取方式为生物酶解，生物酶的加量为：酸性纤维素酶含量1%-5%、酸性果胶酶含量0.1%-1%、碱性果胶酶含量0.2%-3%。

优选的，步骤（3）中所述的益生菌为黑曲霉、枯草芽孢杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、乳酸菌、酵母菌中的两种或三种，总接种量为3%-10%，发酵时间为48-72h。

优选的，步骤（4）中所述的氯化钙加量为25%-40%。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

1. 本发明在原料预处理上对所选用的海带原料进行粉碎处理，使原料的粒度达到80-100目，可显著提高后续的提取效率。