[发明专利]具有增加的活性和热稳定性的逆转录酶突变体

权利要求书

1.一种包含SEQ ID NO:637的氨基酸序列的分离的莫洛尼氏鼠白血病病毒(MMLV)逆转录酶(RT酶)突变体，其中所述MMLV RT酶突变体的氨基酸序列进一步包含至少一个氨基酸取代，所述至少一个氨基酸取代是：

(a)位置61处的异亮氨酸至精氨酸取代(I61R)；

(b)位置68处的谷氨酰胺至精氨酸取代(Q68R)；

(c)位置79处的谷氨酰胺至精氨酸取代(Q79R)；

(d)位置99处的亮氨酸至精氨酸取代(L99R)；

(e)位置282处的谷氨酸至天冬氨酸取代(E282D)；

(f)位置298处的精氨酸至丙氨酸取代(R298A)；

(g)位置299处的谷氨酰胺至谷氨酸取代(Q299E)；

(h)位置332处的苏氨酸至谷氨酸取代(T332E)；

(i)位置433处的缬氨酸至精氨酸取代(V433R)；和/或

(j).位置593处的异亮氨酸至谷氨酸取代(I593E)。

2.根据权利要求1所述的分离的MMLV RT酶突变体，其中所述MMLV RT酶突变体包含SEQID NO:637-699中任一个所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的分离的MMLV RT酶突变体，其中所述MMLV RT酶突变体包含SEQID NO:674所示的氨基酸序列。

4.一种包含SEQ ID NO:637的氨基酸序列的分离的莫洛尼氏鼠白血病病毒(MMLV)逆转录酶(RT酶)突变体，其中所述MMLV RT酶突变体的氨基酸序列进一步包含至少两个氨基酸取代，所述至少两个氨基酸取代是：

(a)位置61处的异亮氨酸至精氨酸取代和位置282处的谷氨酸至天冬氨酸取代(I61R/E282D)；

(b)取代位置99处的亮氨酸至精氨酸和位置282处的谷氨酸至天冬氨酸取代(L99R/E282D)；

(c)位置68处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置282处的谷氨酸至天冬氨酸取代(Q68R/E282D)；

(d)位置79处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置282处的谷氨酸至天冬氨酸取代(Q79R/E282D)；

(e)位置282处的谷氨酸至天冬氨酸取代和位置298处的精氨酸至丙氨酸取代(E282D/R298A)；

(f)位置61处的异亮氨酸至精氨酸取代和位置99处的亮氨酸至精氨酸取代(I61R/L99R)；

(g)位置61处的异亮氨酸至精氨酸取代和位置68处的谷氨酰胺至精氨酸取代(I61R/Q68R)；

(h)位置61处的异亮氨酸至精氨酸取代和位置79处的谷氨酰胺至精氨酸取代(I61R/Q79R)；

(i)位置61处的异亮氨酸至精氨酸取代和位置298处的精氨酸至丙氨酸取代(I61R/R298A)；

(j)位置68处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置99处的亮氨酸至精氨酸取代(Q68R/L99R)；

(k)位置79处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置99处的亮氨酸至精氨酸取代(Q79R/L99R)；

(l)取代位置99处的亮氨酸至精氨酸和位置298处的精氨酸至丙氨酸取代(L99R/R298A)；

(m)位置68处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置79处的谷氨酰胺至精氨酸取代(Q68R/Q79R)；

(n)位置68处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置298处的精氨酸至丙氨酸取代(Q68R/R298A)；或

(o)位置79处的谷氨酰胺至精氨酸取代和位置298处的精氨酸至丙氨酸取代(Q79R/R298A)。

5.根据权利要求4所述的分离的MMLV RT酶突变体，其中所述MMLV RT酶突变体包含SEQID NO:637-699中一个或多个的氨基酸序列。

6.根据权利要求1或4所述的MMLV RT酶突变体，其中所述MMLV RT酶突变体缺乏RNA酶H活性。

7.根据权利要求1或4所述的MMLV RT酶突变体，其中所述MMLV RT酶突变体具有以下特征中的至少一种：增强的DNA合成、增加的保真度或增强的热稳定性。