[发明专利]顺式结合Siglec激动剂及相关组合物和方法

说明书

提供了顺式结合Siglec激动剂。在某些实施例中，顺式结合Siglec激动剂包含带有Siglec配体的支架和膜系链结构域。还提供了组合物，例如，药物组合物，其包含本公开的所述顺式结合Siglec激动剂中的任何顺式结合Siglec激动剂。还提供了例如在对其有需要的个体中激发Siglec活性的方法。还提供了包含顺式结合Siglec激动剂的试剂盒，以及制备所述顺式结合Siglec激动剂的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年6月30日提交的美国临时专利申请号63/046,140的权益，该申请以全文引用的方式并入本文。

政府支持声明

本发明是根据美国国立卫生研究院授予的合同CA227942在政府支持下完成的。美国政府享有本发明的一定权利。

背景技术

唾液酸结合IgG样凝集素(Siglec)是在所有种类的免疫细胞上表达的免疫检查点受体家族。它们结合靶细胞上的各种唾液酸聚糖并向免疫细胞传递信号，这些信号报告靶标是健康还是受损、“自体”还是“非自体”。在14种人Siglec中，有9种含有胞质抑制性信号传导结构域。因此，这些抑制性Siglec与唾液酸聚糖的接合抑制了免疫细胞的活性，从而产生抗炎作用。就这一点而言，抑制性Siglec与T细胞检查点受体CTLA-4和PD-1具有功能相似性。与这些临床确立的用于癌症免疫治疗的靶标一样，最近在拮抗Siglec以增强免疫细胞对癌症的反应性方面存在兴趣激增。相反地，Siglec与激动剂抗体的接合可以在抗炎疗法的背景下抑制免疫细胞反应性。已经研究了该方法以通过CD22(Siglec-2)的激动作用在狼疮患者中实现B细胞抑制，并通过Siglec-8的激动作用耗尽嗜酸性粒细胞以治疗嗜酸性胃肠炎。

发明内容

提供了顺式结合Siglec激动剂。在某些实施例中，顺式结合Siglec激动剂包含带有Siglec配体的支架和膜系链结构域。还提供了组合物，例如，药物组合物，其包含本公开的顺式结合Siglec激动剂中的任何顺式结合Siglec激动剂。还提供了例如在对其有需要的个体中激发Siglec活性的方法。还提供了包含顺式结合Siglec激动剂的试剂盒，以及制备顺式结合Siglec激动剂的方法。

附图说明

图1：糖多肽在效应细胞上顺式聚簇并使Siglec激动。(A)吞噬细胞表达激活受体，这些激活受体接合靶细胞上的“吃掉我(eat-me)”信号，从而刺激吞噬和炎症。(B)顺式配体对Siglec-9的聚簇刺激压制吞噬细胞激活的抑制性信号传导。

图2：pS9L-脂质的代表性合成。(a)THF、3、6h、22℃、手套箱。(b)肼一水合物、MeOH/THF/H₂O、在22℃下24h；经两步85％。(c)4，丙酮酸钠、Pd26ST、NmCSS、NanA、含20mM MgCl₂的200mM Tris pH 8.5、48h；50％。(d)二苯甲基叠氮化物、CuSO₄、BTTAA、tBuOH/H₂O、在22℃下12h；75至100％。

图3：工程化的糖多肽以高亲和力结合Siglec-9。(A)糖多肽基于相同的乳糖丝氨酸支架。pLac仅带有乳糖部分。pSia带有末端Neu5Ac。pS9L带有Siglec-9配体。pS7L带有Siglec-7配体。多肽的N末端用荧光团或生物素部分官能化。(B)带有N末端生物素的可溶性糖多肽结合到链霉抗生物素蛋白包被的尖端。通过将尖端浸入重组Siglec-Fc融合蛋白的溶液中，接着仅浸入缓冲液中对缔合/解离曲线进行测量。数据代表两个独立的实验。(C)THP-1单核细胞用脂质系链糖多多肽包被，用Siglec-9-Fc染色，接着用抗人AlexaFluor647偶联的第二抗体染色。数据代表三个独立实验。