[发明专利]定量细菌生物膜中的内毒素负荷

权利要求书

1.一种用于定量生物膜样品中的内毒素浓度的方法，包括：

用酶消化所述生物膜样品以形成消化的生物膜样品；

将所消化的生物膜样品分离成上清液和细胞沉淀物；

将所述细胞沉淀物与细胞裂解剂组合以释放内毒素并形成内毒素悬浮液；

将所述内毒素悬浮液浓缩成内毒素样品和悬浮液上清液；以及，

对所述内毒素样品进行细菌内毒素测试(BET)测定以获得样品内毒素值。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述消化步骤还包括加热步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述加热步骤在约48℃至52℃的温度下进行。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述消化步骤在约12小时至约24小时的时间段内进行。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述酶包括纤维素酶。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离步骤包括将所消化的生物膜样品离心。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞裂解剂包含螯合剂和盐。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述螯合剂包含EDTA-HCl。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述盐包含Tris-HCl。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述将所述细胞沉淀物与所述细胞裂解剂组合的步骤包括将来自所述细胞沉淀物的细胞悬浮在所述细胞裂解剂中。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述悬浮细胞的步骤包括加热到约22℃至约26℃的温度。

12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，还包括搅拌约10分钟至约30分钟的时间段。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述浓缩所述内毒素悬浮液的步骤包括使所述内毒素悬浮液离心。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括在进行所述BET测定的步骤之前稀释所述内毒素样品的步骤。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述BET测定是鲎变形细胞溶解物(LAL)测定。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述LAL测定是凝胶-凝块测定。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述LAL测定是比浊测定。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述LAL测定是显色测定。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括将β-葡聚糖抑制剂添加到所述内毒素样品中的步骤。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括对所述生物膜样品进行菌落形成单位(CFU)评估以获得CFU值，使得能够确定所述内毒素值和所述CFU值之间的关系。