[发明专利]一种适应猪流行性腹泻病毒的Vero-E6悬浮细胞株sVero-E6及其应用

权利要求书

1.一种Vero-E6悬浮细胞株，命名为sVero-E6悬浮细胞株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202151，保藏日期为2021年1月29日。

2.根据权利要求1所述的sVero-E6悬浮细胞株CCTCC NO：C202151，在用其培养猪流行性腹泻病毒收获的病毒培养液中，病毒的滴度为6.00 TCID₅₀/0.1ml以上，且sVero-E6细胞的活率为70%以上。

3.根据权利要求2所述的sVero-E6悬浮细胞株CCTCC NO：C202151，在用其培养猪流行性腹泻病毒收获的病毒培养液中，病毒的滴度为6.50 TCID₅₀/0.1ml以上，且sVero-E6细胞的活率为73.24%-93.50%。

4.利用权利要求1-3中任一项所述的sVero-E6悬浮细胞株CCTCC NO：C202151培养猪流行性腹泻病毒的方法，其包括以下步骤：

S1：将sVero-E6悬浮细胞株在营养液中扩大培养，获得细胞悬液；

S2：向步骤S1获得的细胞悬液中加入等体积的病毒维持液，随后加入EDTA-胰酶，并接种猪流行性腹泻病毒种毒，培养；

S3：收获病毒培养液。

5.根据权利要求4所述的方法，其中步骤S1中使用摇瓶进行所述扩大培养，扩大培养的条件为：35.0℃-37.0℃，5.0% CO₂，100 rpm/min -130 rpm/min摇床培养48-72 h；和/或

步骤S2中使用摇瓶进行所述培养，培养的条件为：35.0℃-37.0℃，5.0% CO₂，100 rpm/min -130 rpm/min摇床培养48-96 h。

6.根据权利要求4所述的方法，其中步骤S1中使用生物反应器进行所述扩大培养，扩大培养的条件为：35.0℃-37.0℃，溶氧浓度35%-55%，搅拌转速为：45 rpm/min-65 rpm/min，pH 7.0-7.4，培养48-72 h；和/或

步骤S2中使用生物反应器进行培养，培养的条件为：35.0℃-37.0℃，溶氧浓度35%-55%，搅拌转速为：45 rpm/min-65 rpm/min，pH 7.0-7.4条件下培养24-96 h。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中步骤S3中在收获的病毒培养液中，sVero-E6细胞的活率为70%以上，且病毒的滴度为6.00 TCID₅₀/0.1ml以上。

8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤S3中在收获的病毒培养液中，sVero-E6细胞的活率为73.24%-93.50%，且病毒的滴度为6.50 TCID₅₀/0.1ml以上。

9.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中步骤S3中收获的病毒培养液为用于生产猪流行性腹泻病毒灭活疫苗，所述收获病毒培养液的操作包括：

S31：收获步骤S2中培养后的病毒培养上清液，得到第一病毒培养液，并向剩余的病毒培养液中补加新的病毒维持液至培养体积，继续培养；

S32：重复N次步骤S31，将N次获得的病毒培养液与第一病毒培养液合并，其中N≥1。

10.根据权利要求9所述的方法，步骤S31中所述新的病毒维持液为体积比为1:（1-5）的病毒维持液DMEM和Celkey® CD ST 239的混合液。

11.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其中步骤S2中所述猪流行性腹泻病毒种毒为猪流行性腹泻病毒的弱毒株或强毒株。