[发明专利]测定透明质酸-季铵盐聚合物中季铵盐含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定透明质酸‑季铵盐聚合物中季铵盐含量的方法，所述方法包括：供试品溶液的制备：将透明质酸‑季铵盐聚合物水解得到透明质酸和季铵盐的混合溶液，接着加入盐溶液和乙腈对透明质酸进行沉降，得到的上清液作为供试品溶液；使用离子色谱法测定供试品溶液中游离季铵盐的含量。本发明所述的方法利用高浓度的盐溶液和乙腈的共同作用，降低透明质酸在水溶液中的溶解度，从而能够准确地测定季铵盐的含量，具有较高的检测准确度和分离度。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种测定透明质酸-季铵盐聚合物中季铵盐含量的方法。

背景技术

透明质酸含有多个活性基团，可进行修饰。季铵盐可以连接到透明质酸的活性基团上形成透明质酸接枝聚合物。2，3-环氧丙基三甲基氯化铵(Glycidyl trimethylammonium chloride，GTA)是一种常用的季铵盐，可以与透明质酸接枝形成HA-GTA聚合物。反应结束后，会有部分GTA残留在产物中，检测产物中残留GTA的含量，即可得到HA-GTA聚合物的纯度。同时，为了验证GTA的接枝率，需要将HA-GTA聚合物分解得到2,3-二羟基丙基-三甲基氯化铵((2,3-Dihydroxypropyl)trimethyl ammonium chlorid，DTA)，通过检测水溶液中的DTA的含量，即可得到HA的接枝率。

现有技术中，还未发现直接用于检测GTA或者DTA的方法，季铵盐作为阳离子，常用离子色谱检测进行检测，利用常规的季铵盐检测方法检测GTA或者DTA会出现拖尾、保留时间飘移等现象，干扰检测精确度。此外，产物中含有透明质酸，需要进行前处理，因透明质酸亲水性强，导致水解后溶液中含有大量的有机糖类，被色谱柱吸附，损害色谱柱寿命，因此，需要对水解液中的透明质酸进行沉降。目前常用的沉降法为醇沉，但是由于聚合物反应改变了透明质酸的性质，导致醇沉法不在适用，需要开发新的检测方法。

发明内容

鉴于上述问题，本发明提供了一种测定季铵盐的方法，特别是透明质酸和季铵盐同时存在的情况下，可以去除透明质酸的干扰，准确测定季铵盐的含量，所述方法还可以用于测定透明质酸-季铵盐聚合物的纯度以及接枝率，所述方法具有较高的检测准确度和分离度。

本发明具体技术方案如下：

1.一种测定透明质酸-季铵盐聚合物中季铵盐含量的方法，其包括：

供试品溶液的制备：将透明质酸-季铵盐聚合物水解得到透明质酸和季铵盐的混合溶液，接着加入盐溶液和乙腈对透明质酸进行沉降，得到的上清液作为供试品溶液；

使用离子色谱法测定供试品溶液中游离季铵盐的含量。

2.根据项1所述的方法，其中，盐溶液和乙腈的体积比在1：4以上，优选为1:4-1:6；

所述盐溶液为氯化钠溶液、硫酸铵溶液或甲酸铵溶液；

所述透明质酸和季铵盐的混合溶液与所述盐溶液和乙腈总体积的体积比为4:3-9。

3.根据项1或2所述的方法，其中，所述季铵盐为2，3-环氧丙基三甲基氯化铵和/或2,3-二羟基丙基-三甲基氯化铵。

4.根据项1-3中任一项所述的方法，其中，色谱柱为羧酸官能化阳离子交换色谱柱，优选为CS12A色谱柱。

5.根据项1-4中任一项所述的方法，其中，流动相为甲磺酸和乙腈，优选的，甲磺酸与乙腈的体积比为60-80:20-40，进一步优选为65-72:28-35；

优选地，甲磺酸的浓度为10-30mmol/L，优选为10-15mmol/L。

6.根据项1-5中任一项所述的方法，其中，流动相流速为0.5-1.5ml/min，优选为0.5-1ml/min。

7.根据项1-6中任一项所述的所述方法，其中，进样量为20-100μL。