[发明专利]子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法

说明书

本发明公开了一种子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法及应用，其中先进行人脐带间充质干细胞的获取，其中对从冷藏罐中取出人脐带间充质干细胞进行解冻，并接种于培养瓶中，然后制备单细胞悬液，其中将培养瓶中培育的人脐带间充质干细胞进行传代，然后将UC‑MSCs胰酶消化后制备单细胞悬液，接着进行复合培养，即取单细胞悬液均匀滴加到胶原支架上，从而制得子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞，最后进行后续培养。本发明用人脐带间充质干细胞于胶原支架进行混合培养，通过较为简单的技术将已通过SFDA批准的胶原支架用于子宫内膜修复技术，安全性好，有利于干细胞治疗严重子宫内膜损伤的科学研究。

技术领域

本发明涉及到一种妇产科学技术领域，特别涉及一种子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法及应用。

背景技术

子宫内膜严重损伤时内膜功能性修复障碍，代之以结缔组织增生修复，子宫前后壁发生纤维化，瘢痕形成，临床上主要表现为宫腔粘连、闭经及子宫性不孕等。如何重建这些患者的内膜并使其恢复正常的形态及功能是当今再生医学的难题之一。在研究的过程中，学者们提出过多种不同的治疗方式，如宫内节育器使用，球囊导管，粘连分离术后雌激素或者透明质酸应用等，各种治疗方式各有其优缺点，纵观文献报道的结果，这些治疗效果存在争议并且令人失望。因此，针对子宫内膜损伤亟需新型治疗方法。

随着多种不同来源的人体干细胞的发现和鉴定，干细胞的治疗应用可能性也在不断被发掘，并建立了再生医学这个新的医学分支，旨在利用干细胞治疗目前尚不能用药物治愈的疾病。胶原是细胞外基质的主要成分，其具有来源广泛、生物相容性良好、可降解、制备工艺简单等优点，胶原支架已经经过国家食品药品监督管理总局(CFDA)批准应用于临床皮肤及口腔黏膜修复中。间充质干细胞(MSCs)为间质组织来源的与骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)生物学性状相似，具有多向分化潜能的细胞。MSCs是多潜能的成体基质细胞，能分化为多种间质起源的组织，如成骨、软骨和脂肪细胞，在特殊环境下，还能横向分化为肌细胞、神经细胞、血管内皮细胞、肝胰细胞等多种其他组织细胞。人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)即是MSCs的一种。与BM-MSCs相比，UC-MSCs的SH2、CD106和HLA-1表达低，OCT mRNA表达阳性，这说明脐带UC-MSCs是一种更原始的MSCs群。大量的体外实验证明，在不同诱导条件下，UC-MSCs不仅可以向多种中胚层来源的组织细胞分化，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞等，还可以向外胚层和内胚层来源的神经元样细胞和肝细胞样细胞分化。这提示我们可以利用UC-MSCs进行子宫内膜的修复。

由于人类子宫空腔结构的特殊性，利用干细胞的治疗很难将细胞定位到受损内膜处，细胞易随着血液、体液等流动发生组织扩散及损失，其临床应用的有效性和安全性受到制约，这要求在修复的同时能够为细胞在局部组织附着提供条件。所以需要预先制备适用于子宫内膜修复的胶原支架复合脐带干细胞，同时希望其具备操作过程简单，安全性高的特点。

发明内容

发明的目的在于提供一种子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法及应用，该发明具有过程相对简单且安全性好的优点，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞制备方法，包括以下步骤：

S1：人脐带间充质干细胞的获取，其中将处于冷冻状态的人脐带间充质干细胞从冷藏罐中取出，并对人脐带间充质干细胞进行解冻，加入完全培养液，并接种于培养瓶中；

S2：制备单细胞悬液，其中将培养瓶中培育的人脐带间充质干细胞进行传代，然后将UC-MSCs胰酶消化后制备单细胞悬液；

S3：复合培养，取单细胞悬液均匀滴加到胶原支架上，从而制得子宫内膜修复用胶原支架复合脐带干细胞；

S4：后续培养，将制得的胶原支架复合脐带干细胞加入到完全培养基继续培养，然后放入培养箱中培养。