[发明专利]一种降低病毒感染导致的昆虫细胞凋亡的方法

权利要求书

1.一种重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒含有细胞凋亡调控因子iap1、iap2和iap3的编码序列，同时表达iap1、iap2和iap3；所述iap1的编码序列为SEQ ID NO:9所示的序列，所述iap2的编码序列为SEQ ID NO:10所示的序列，所述iap3的编码序列为SEQID NO:11所示的序列，所述杆状病毒为AcMNPV。

2.一种如权利要求1所述重组杆状病毒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）以野生型BsNPV病毒基因组为模板，基因扩增获得细胞凋亡调控因子iap1、iap2和iap3；

（2）将步骤（1）获得的细胞凋亡调控因子iap1、iap2、iap3和egfp共同连接到原始质粒pFBDM上，获得可同时表达iap1、iap2、iap3和egfp的重组质粒pFBDM-iap1-iap2-iap3-egfp；

（3）将步骤（2）获得的重组质粒pFBDM-iap1-iap2-iap3-egfp转至E.coli Sw106菌株，完成Tn7转座和基因重组，构建出E.coli Sw106 Bacmid-iap1-iap2-iap3-egfp；

（4）将步骤（3）获得的E.coli Sw106 Bacmid-iap1-iap2-iap3-egfp侵染昆虫sf9细胞，生产得到重组杆状病毒AcMNPV-iap1-iap2-iap3-egfp。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中扩增iap1的引物包括如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物；所述步骤（1）中扩增iap2的引物包括如SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4所示的引物；所述步骤（1）中扩增iap3的引物包括如SEQ ID NO:5和SEQID NO:6所示的引物。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中重组质粒pFBDM-iap1-iap2-iap3-egfp含有如SEQ ID NO:9- SEQ ID NO:12所示的序列。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中基因扩增获得细胞凋亡调控因子iap1、iap2和iap3：

以野生型BsNPV病毒基因组为模板，使用如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物扩增获得基因片段iap1，在基因片段iap1上下游分别引入了限制性内切酶位点，其中上游为BamH I，下游为Sal I；

以野生型BsNPV病毒基因组为模板，使用如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物扩增获得基因片段iap2，在基因片段iap2上下游分别引入了限制性内切酶位点，其中上游为Xma I，下游为Xho I；

以野生型BsNPV病毒基因组为模板，使用如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的引物扩增获得基因片段iap3，在基因片段iap3上下游分别引入了限制性内切酶位点，其中上游为BamH I，下游为Sal I；

所述步骤（2）中egfp是以增强型绿色荧光蛋白基因egfp为模板，使用如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的引物扩增获得的，在egfp上下游分别引入了限制性内切酶位点，其中上游为Xma I，下游为Xho I。