[发明专利]快速检测家蚕核型多角体病毒的探针、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种本发明公开了一种快速检测家蚕核型多角体病毒的探针，能够通过RAA技术来快速检测家蚕核型多角体病毒；还公开了快速检测家蚕核型多角体病毒的试剂盒，检测快速，灵敏度高；还公开了快速检测家蚕核型多角体病毒的试剂盒的检测方法，减少了试剂混合加样步骤，操作方便，节省时间。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种快速检测家蚕核型多角体病毒的探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

家蚕核型多角体病是最古老的病毒性蚕病，在蚕的各个龄期和各发育阶段都有发生。目前检测家蚕是否带有核型多角体病的常用方法是PCR核酸扩增技术，荧光定量PCR技术，但是PCR核酸扩增技术存在检验设施条件高的问题，荧光定量PCR技术存在检测繁琐的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种快速检测家蚕核型多角体病毒的探针，探针的核苷酸序列为：TCAAAAACGAAGAGCGGTTGACTA/i6FAMdT/[THF]GC/iBHQ1dT/AAGAAAAACGA；

本发明的另外一个目的是提供一种快速检测家蚕核型多角体病毒的试剂盒，检测快速，灵敏度高；

本发明还有一个目的是提供一种所述的快速检测家蚕核型多角体病毒的试剂盒的检测方法减少了试剂混合加样步骤，操作方便，节省时间。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种快速检测家蚕核型多角体病毒的探针，探针的的核苷酸序列为：TCAAAAACGAAGAGCGGTTGACTA/i6FAMdT/[THF]GC/iBHQ1dT/AAGAAAAACGA。

快速检测家蚕核型多角体病毒的试剂盒，包括：上游引物、下游引物、探针。

优选的是，所述上游引物的核苷酸序列为：CTCAGAATGTGGATAATGTAAAAGGTCA；所述下游引物的核苷酸序列为：ACTAGCGTCTACATCTTTAATCTCGCCAGA。

优选的是，所述上游引物、所述下游引物和所述探针为混合均匀的冻干粉。

快速检测家蚕核型多角体病毒的试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

S1、将待测物研磨粉碎或匀浆破碎，加入裂解液静置裂解后，取上清液，得待测液；

S2、取三份试剂盒，将每份试剂盒中的所有试剂混合均匀，得三份预混物；

S3、向每份预混物中加入buffer A，待混合均匀后，其中一份中加入待测液，得检测组，另外两份分别加入与所述待测液相同量的阳性DNA对照模板和阴性对照模板，分别得阳性对照组和阴性对照组；

S4、向所述检测组、所述阳性对照组和所述阴性对照组中均加入buffer B，震荡混匀后，离心，将所述检测组、所述阳性对照组和所述阴性对照组中的溶液离心至试管底部，分别得到待检测的检测组、待检测的阳性对照组和待检测的阴性对照组；

S5、将所述待检测的检测组、所述待检测的阳性对照组和所述待检测的阴性对照组均放入带有荧光检测功能的仪器中，设定程序39.2℃，检测15-20min。

优选的是，步骤S3中所述buffer A为20％PEG，步骤S4中所述buffer B为醋酸镁。

优选的是，所述阴性对照模板为20％PEG。

优选的是，所述阳性DNA对照模板为插入EB1基因片段的重组质粒。

优选的是，所述阳性DNA对照模板的模板为30000拷贝/μL。

本发明至少包括以下有益效果：