[发明专利]用于多重PCR二代测序的引物组合、试剂盒及建库方法

权利要求书

1.一种用于多重PCR的二代测序的引物组合，其特征在于，包括：如SEQ ID NO:1-SEQID NO:806所示核苷酸序列。

2.一种用于多重PCR的二代测序的试剂盒，其特征在于，包括：用于第一步PCR扩增试剂盒和用于第二步PCR扩增试剂盒；

所述用于第一步PCR扩增试剂盒包括：Platinum Multiplex PCR Master Mix 2×、GCEnhancer和权利要求1所述引物组合；

所述用于第二步PCR扩增试剂盒包括：2×KAPA HiFi Hotstart Ready Mix、PE1.0和Barcode。

3.一种用于多重PCR的二代测序的扩增体系，其特征在于，包括第一步PCR扩增体系和第二步PCR扩增体系；

所述第一步PCR扩增体系包括：25体积份的Platinum Multiplex PCR Master Mix 2×、5体积份的GC Enhancer、15体积份的权利要求1所述引物组合和5体积份的DNA样本；

所述第二步PCR扩增体系包括：25体积份的2×KAPA HiFi Hotstart Ready Mix、1体积份的PE1.0、1体积份的Barcode和23体积份的第一步PCR扩增纯化产物。

4.一种基于多重PCR的二代测序的建库方法，其特征在于，包括：

1)、提取样本DNA；

2)、基于提取的样本DNA，配置权利要求3中所述第一步PCR扩增体系，进行第一步PCR扩增并纯化，

3)、基于第一步PCR扩增并纯化后的纯化产物进行第二次PCR扩增并纯化；

4)、对第二次PCR扩增并纯化后的纯化产物进行电泳鉴定后进行测序分析。

5.如权利要求4所述基于多重PCR的二代测序的建库方法，其特征在于，所述第一步PCR扩增的条件为：98℃、3分钟，循环一次；96℃、45秒，80℃、30秒，54℃、3分钟，68℃、30秒，循环45次。

6.如权利要求4所述基于多重PCR的二代测序的建库方法，其特征在于，所述第二次PCR扩增的条件为：98℃、3分钟，循环一次；98℃、20秒，65℃、30秒，72℃、20秒，循环15次；68℃保持10分钟。

7.如权利要求4所述基于多重PCR的二代测序的建库方法，其特征在于，所述电泳鉴定的条带长度在100-200bp之间。

8.如权利要求4所述基于多重PCR的二代测序的建库方法，其特征在于，所述测序分析采用HiSeq2000测序平台进行测序，上靶率高于98％，平均深度深于985×，98.9％的位点测序深度在10×以上。

9.如权利要求4所述基于多重PCR的二代测序的建库方法，其特征在于，所述样本DNA来源于外周静脉血、组织或鼻咽拭子样本。

10.权利要求1所述用于多重PCR的二代测序的引物组合或权利要求2所述用于多重PCR的二代测序的试剂盒在制备多重PCR二代测序试剂中的应用。