[发明专利]一种甲硫氨酸裂解酶及其编码基因和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，提供一种甲硫氨酸裂解酶及其编码基因和应用，该甲硫氨酸裂解酶的编码基因的cDNA序列为(a)、(b)和(c)中的任一所示：(a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸；(b)与SEQ ID No.1的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的核苷酸；(c)与如SEQ ID No.1所示的核苷酸至少有80％以上同源性的核苷酸序列。并进一步提出了该甲硫氨酸裂解酶的制备工艺和具体应用，该甲硫氨酸裂解酶能够在高温65℃条件下高效降解甲硫氨酸，并耦合巴氏杀菌工艺去除食品的甲硫氨酸。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种甲硫氨酸裂解酶及其编码基因和应用。

背景技术

甲硫氨酸裂解酶在医疗健康领域具有广泛的应用。研究结果证明，正常细胞对胞内甲硫氨酸浓度降低具有一定的耐受性，且甲硫氨酸浓度降低将减少胞内活性氧的种类，延长正常细胞的寿命、提高抗胁迫、代谢适应以及抗氧化功能，利用甲硫氨酸裂解酶降低正常细胞胞内甲硫氨酸含量将成为抗衰老的一项重要技术。同时，甲硫氨酸裂解酶降低胞内甲硫氨酸的浓度，显著抑制恶性肿瘤细胞的生长和迁移，通过食品添加甲硫氨酸裂解酶以降低哺乳动物胞内甲硫氨酸的浓度成为一项极具发展潜力治疗甲硫氨酸依赖肿瘤的重要手段。

但是，目前现有的甲硫氨酸裂解酶的转化率较低，无法有效降低食物中的甲硫氨酸，因此，亟待提供一种更加有效的甲硫氨酸裂解酶，以至少部分解决上述技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种甲硫氨酸裂解酶及其编码基因和应用，以至少部分地解决上述的技术问题。

1、一种甲硫氨酸裂解酶的编码基因，其特征在于，其cDNA序列为(a)、(b)和(c)中的任一所示。

(a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸；

(b)与SEQ ID No.1的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的核苷酸；

(c)与如SEQ ID No.1所示的核苷酸至少有80％以上同源性的核苷酸序列。

上述“严谨杂交条件”，意指在所属领域中已知的低离子强度和高温条件。通常，在严谨条件下，探针与其靶序列杂交的可检测程度比其他序列杂交的可检测程度更高(例如超过本底至少2倍)。严谨序列杂交是序列依赖性的，在不同的环境条件下将会不同，较长的序列在较高温度下特异杂交。通过控制杂交的严谨性或洗涤条件可鉴定与探针100％互补的靶序列。对于核酸杂交的详细指导，可参考文献3。更具体的，所述严谨条件通常被选择为低于特异序列在规定离子强度及pH下的热熔点(Tm)5-10℃。Tm为在平衡状态下50％与目标互补的探针杂交到目标序列时所处的温度(在指定离子强度、pH和核酸浓度下)。因为目标序列过量存在，在Tm下在平衡状态下50％的探针被占据。严谨条件可为以下条件：其中在pH值7.0-8.3下，盐浓度低于约1.0M钠离子浓度，通常为0.01M-1.0M钠离子浓度(或其它盐)，并且温度对于短探针(包括(但不限于)10到50个核苷酸)而言为至少约30℃，而对于长探针(包括(但不限于)大于50个核苷酸)而言为至少约60℃。严谨条件也可通过加入诸如甲酰胺的去稳定剂来实现。对于选择性或特异性杂交而言，正信号可为至少两倍的背景杂交，视情况为10倍背景杂交。例示性严谨杂交条件可如下：50％甲酰胺，5×SSC和1％SDS，在42℃下培养；或5×SSC，1％SDS，在65℃下培养，在0.2×SSC中洗涤和在65℃下于0.1％SDS中洗涤。所述洗涤可进行5min、15min、30min、60min、120min或更长时间。

本发明的甲硫氨酸裂解酶的编码基因的有益效果是：

本发明的甲硫氨酸裂解酶的编码基因，能够在宿主细胞中高效表达甲硫氨酸裂解酶，该甲硫氨酸裂解酶能够在高温65℃条件下达到较高的甲硫氨酸裂解效率，能耦合巴氏杀菌工艺去除食品中的甲硫氨酸。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。