[发明专利]一种植物愈伤组织透化液及其应用

说明书

本发明涉及生物技术技术领域，具体涉及一种植物愈伤组织透化液及其应用。所述的透化液包括重量份的以下组分：2％纤维素酶，0.4％离析酶，1％果胶酶，1％半纤维素酶，0.4％蜗牛酶。本发明提供的一种植物愈伤组织透化液，可以有效释放植物组织样品中的RNA，可用于和微阵列相结合以及反转录的棉花愈伤组织空间转录组分析。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，具体涉及一种植物愈伤组织透化液及其应用。

背景技术

棉花组织培养是棉花遗传转化的重要手段，然而棉花愈伤组织的形成和愈伤组织向胚性愈伤组织的转化受很多条件的限制，如棉花品种和基因型。研究愈伤组织在细胞分辨率上空间基因的表达水平有助于揭示关键基因调控细胞分化、细胞相互作用、组织形态发生的潜在机制。在这些过程中，基因的表达受到严格的调控，核心调节基因的表达和相互协调决定着细胞命运。因此，探索基因在空间上的表达模式对于揭示调控植物发育的核心基因及其机制至关重要。

目前，从细胞水平上检测基因表达模式的技术有激光捕获显微切割技术(Lasercapture microdissection，LCM)、荧光标记细胞的FACS和特定细胞类型的核标记分离(Isolation of nuclei tagged in specific cell types，INTACT)等，但是却不能高效地实现基因定位，存在检测细胞数目有限、操作复杂等问题。

近几年，为研究哺乳动物组织中二维基因表达模式开发了一种新的技术，称为空间转录组技术。该技术在研究人类疾病、器官发育等方面取得重要进展，但由于动物和植物组织细胞的差异性，使得其在植物研究中的应用十分受限。空间转录组技术是利用微阵列捕获组织切片上垂直流出的转录本，然后使用Fluorescent RT Master Mix在微阵列表面进行反转录。在反转录和随后的扩增过程中，位置特异性的条形码被整合在cDNA中，用来指示该基因在组织上的空间位置。由于受细胞壁的限制，cDNA的有效释放和垂直进入微阵列是植物组织区别于动物组织的一大难点。在动物组织切片中是利用1％胃蛋白酶作为透化液使细胞释放RNA，胃蛋白酶是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃内的消化主要是对蛋白质初步分解，胃蛋白酶具有分解蛋白质的作用。但是胃蛋白酶不能有效的消化棉花愈伤组织，因此需要一种更加有效的透化液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效释放植物愈伤组织RNA的透化液。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种植物愈伤组织透化液，其特征在于，所述的透化液包括重量份的以下组分：2％纤维素酶，0.4％离析酶，1％果胶酶，1％半纤维素酶，0.4％蜗牛酶。

进一步的，所述的纤维素酶为纤维素酶R10。

进一步的，所述的离析酶为离析酶R10。

本发明还提供一种植物愈伤组织透化液应用。

一种植物愈伤组织透化液，用于释放植物组织样品中RNA。

本发明还提供另一种植物愈伤组织透化液应用。

一种植物愈伤组织透化液，用于释放植物组织样品中RNA，用于和微阵列相结合以及反转录的愈伤组织空间转录组分析。

本发明还提供一种用于植物愈伤组织空间转录组分析的组织切片透化方法。

一种用于植物愈伤组织空间转录组分析的组织切片透化方法，所述的方法包括：

S101组织切片释放RNA：

将Visium玻片放在Cassette中，贴着左下角向孔中加入70μl透化液，轻拍Cassette，贴上密封条；