[发明专利]一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺

说明书

本发明属于蛋白酶技术领域，尤其涉及一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，包括以下工艺步骤：将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体‑蛋白酶溶液；用微孔滤膜过滤，得到包裹蛋白酶的脂质体。本发明利用脂质体包裹蛋白酶，将蛋白酶与外界环境隔开，保护其不受环境条件影响，防止其氧化变质，延长其活性时间，增加了蛋白酶的稳定性，且脂质体可通过胞吞或膜融合等方式将蛋白酶转入细胞内，能有效解决其作为生物大分子难以透过细胞膜的难题，可大大提高其作用效果和利用率。

技术领域

本发明属于蛋白酶技术领域，尤其涉及一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺。

背景技术

蛋白酶是生物体内的一类酵素，是水解蛋白质肽键的一类酶的总称，它们能够有效分解蛋白质，分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的月示和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。

由于蛋白酶对环境条件敏感，容易氧化变质，造成应用上的缺陷。脂质体是由磷脂双分子层形成的内部包含水相的封闭囊泡，具有缓释性、细胞亲和性、组织相容性等优点，已成功应用于医药、化工、化妆品等领域中。因此，研究出一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，以提高蛋白酶的稳定性和生物利用性，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺，包括以下工艺步骤：

（1）将膜材溶于有机溶剂中，经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜；

（2）将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶液；

（3）向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂质薄膜，冰浴超声，得到脂质体-蛋白酶溶液；

（4）用微孔滤膜过滤，得到包裹蛋白酶的脂质体。

优选的，步骤（1）中，所述膜材包括胆固醇和卵磷脂，所述胆固醇和卵磷脂的重量比为1∶2～1∶6。

优选的，步骤（1）中，所述的有机溶剂中膜材浓度为4.0～5.5mg/mL；所述减压蒸发的温度为50～70℃。

优选的，步骤（1）中，所述有机溶剂包括无水乙醇、无水乙醚、乙醇和氯仿中的一种或多种的组合。

优选的，步骤（2）中，所述溶剂为磷酸盐缓冲溶液，PH值为6.0～7.0。

优选的，步骤（2）中，所述蛋白酶溶液中蛋白酶的浓度为0.5～1.5mg/ml。

优选的，步骤（4）中，所述脂质体的直径为50～200nm。

优选的，步骤（4）中，得到包裹蛋白酶的脂质体后，再用花色苷进行包覆，得到花色苷包覆的蛋白酶脂质体。

花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，广泛存在于植物的花、果实、茎、叶和根器官的细胞液中，研究证明花色苷具有清除体内自由基、增殖叶黄素、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、预防糖尿病、减肥、保护视力等功效。通过花色苷进行包覆，可以充分利用花色苷的特性，赋予蛋白酶脂质体新的功能。