[发明专利]杂交瘤细胞冻存液及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202111627576.7 | 申请日： | 2021-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN114190364B | 公开（公告）日： | 2023-02-24 |
| 发明（设计）人： | 曹林;冯速;张晓颖;陈宏洋;陈超 | 申请（专利权）人： | 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210046 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杂交瘤 细胞 冻存液 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，由DMEM/F12培养基、二甲基亚砜、牛血清白蛋白、谷氨酰胺、维生素C、维生素E、胰岛素样生长因子1和表皮细胞生长因子组成，其中DMEM/F12培养基体积百分含量为72.5-82.5％、二甲基亚砜体积百分含量为7.5％、牛血清白蛋白体积百分含量为10-20％；
所述谷氨酰胺在冻存液中的浓度为3-10mM；
所述维生素C在冻存液中的浓度为30-80mg/L；
所述维生素E在冻存液中的浓度为20-100mg/L；
所述胰岛素样生长因子1在冻存液中的浓度为40-110ng/mL；
所述表皮细胞生长因子在冻存液中的浓度为20-110ng/mL；
所述杂交瘤细胞为小鼠杂交瘤细胞ATCC CRL-1606。
2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述谷氨酰胺在冻存液中的浓度为4-8mM。
3.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述维生素C在冻存液中的浓度为40-60mg/L。
4.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述维生素E在冻存液中的浓度为40-80mg/L。
5.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述胰岛素样生长因子1在冻存液中的浓度为50-100ng/mL。
6.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞冻存液，其特征在于，所述表皮细胞生长因子在冻存液中的浓度为25-100ng/mL。
7.权利要求1-6任一项所述杂交瘤细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取配方量的DMEM/F12培养基和二甲基亚砜DMSO制成混合液A，涡旋混合均匀；
(2)取混合液A，加入配方量的牛血清白蛋白、维生素C、维生素E、谷氨酰胺、胰岛素样生长因子1和表皮细胞生长因子，制成混合液B，涡旋混合均匀，确保添加剂完全溶解；
(3)混合液B无菌过滤。
8.根据权利要求7所述的杂交瘤细胞冻存液的制备方法，其特征在于，所述无菌过滤采用0.22μm滤器。
9.权利要求1-6任一项所述杂交瘤细胞冻存液在冷冻保存杂交瘤细胞中的应用，所述杂交瘤细胞为小鼠杂交瘤细胞ATCC CRL-1606。
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