[发明专利]一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法在审
| 申请号： | 202111605876.5 | 申请日： | 2021-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN114214376A | 公开（公告）日： | 2022-03-22 |
| 发明（设计）人： | 朱理平;李子杰;陈科才;高晓冬;陈洲;胡扬帆 | 申请（专利权）人： | 东台市浩瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/02 | 分类号： | C12P19/02;C12P19/24;C12N15/70;C12N15/53;C12N15/55;C12N15/60 |
| 代理公司： | 潍坊正信致远知识产权代理有限公司 37255 | 代理人： | 王伟霞 |
| 地址： | 224234 江苏省盐*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 细胞 转化 合成 果糖 方法 | ||
1.一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法，其特征在于：所述方法中反应体系包括底物甘油、L-甘油醛、焦磷酸，经过诱导后的重组大肠杆菌的湿菌体，所述反应体系经过催化反应后即可得到L-果糖。
2.根据权利要求1所述的一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法，其特征在于：催化反应时整个反应体系的甘油浓度为300-700mM，L-甘油醛浓度为10-50mM，焦磷酸浓度为10-100mM，所述反应体系的pH为4.5-8，反应温度为25-45℃，反应时间6-20h，所述重组大肠杆菌湿菌体的终浓度为50-250g/L。
3.根据权利要求2所述的一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法，其特征在于：催化反应时整个反应体系的甘油浓度为500mM，L-甘油醛浓度为40mM，焦磷酸浓度为80mM，pH为7.0，反应温度为30℃，反应时间为12h，所述重组大肠杆菌湿菌体终浓度为100g/L。
4.根据权利要求1所述的一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法，其特征在于：所述重组大肠杆菌为同时表达酸性磷酸酶PhoN、磷酸甘油氧化酶GPO和L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶RhaD的重组大肠杆菌。
5.根据权利要求1所述的一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法，其特征在于：所述重组大肠杆菌的构建方法为：将编码L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶RhaD的基因rhaD、磷酸甘油氧化酶GPO的基因glpO和酸性磷酸酶PhoN的基因phoN，依次插入到pET28a质粒，得到重组质粒pET28a-rhaD-glpO-phoN，再将重组质粒pET28a-rhaD-glpO-phoN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，得到重组大肠杆菌。
6.根据权利要求5所述的一种利用全细胞转化合成L-果糖的方法，其特征在于：所述重组大肠杆菌在LB培养基中37℃培养，OD600为0.8时，加入终浓度为0.1mM IPTG，16℃诱导20h，收集得到湿菌体。
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