[发明专利]定位于线粒体的融合蛋白、接头及其用途

说明书

本发明涉及生物医学基础研究领域，特别是涉及定位于线粒体的融合蛋白、接头及其用途，所述融合蛋白包括线粒体定位多肽、目的蛋白和标记蛋白，所述线粒体定位多肽和目的蛋白之间，以及目的蛋白和标记蛋白之间均通过接头连接，所述接头为通过在柔性连接肽两端连接酶切位点获得的。本发明的接头能够增强融合蛋白线粒体靶向定位表达的高效性和有效性，融合蛋白能够用于线粒体相关的研究中，用于开发与线粒体相关疾病的疫苗或药物，并实现高效定向给药，具有广泛应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学基础研究领域，特别是涉及定位于线粒体的融合蛋白、接头及其用途。

背景技术

在分子生物学中融合蛋白起着十分重要的作用，比如融合蛋白可以是在蛋白质的末端连上标签用于Western Blot检测或者纯化等实验。融合蛋白也可以是将研究目的蛋白与另一个标记蛋白连接，当标记蛋白为荧光蛋白时，可用于目的蛋白的示踪和图像学分析；当标记白蛋白或抗体Fc片段时，可以用来延长目的蛋白的半衰期；将两个目的蛋白连接，用来研究这两个目的蛋白的相互作用及功能。

在构建融合蛋白中，影响蛋白质的折叠和稳定性的关键因素是两蛋白间的接头(Linker)，它包括以下四个要素：第一，接头序列的长度，如果接头序列太短，可能影响两个蛋白高级结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，会引入新的抗原，涉及免疫原性的问题；第二，接头的刚性，蛋白Linker通常可分为柔性Linker、刚性Linker和可剪切Linker三种，其中柔性Linker可以增加保持蛋白结构域之间的相互作用、增加蛋白结构域之间的距离，刚性Linker可以保持蛋白结构域之间的固定距离，可剪切Linker是保证在体内可被剪切从而使结构域分离，如P2A、T2A之类。

线粒体是细胞进行三羧酸循环和氧化磷酸化的重要场所，是细胞生命活动的最主要能量来源。组成线粒体结构和参与三羧酸循环等能量代谢和电子传递活动的蛋白质绝大多数都是由核DNA编码并在细胞质核糖体上合成后，再通过线粒体定位信号肽运送到线粒体中的指定位置。所以，核基因组正是通过编码的线粒体定位信号实现了对线粒体生命活动的控制。

目前对于线粒体定位的融合蛋白及其接头还没有可靠的选择标准，对于序列和结构之间的关系的了解也很有限。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供定位于线粒体的融合蛋白、接头及其用途，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供柔性连接肽在制备定位于线粒体的融合蛋白中的用途。

本发明还提供用于制备融合蛋白的接头，所述接头为通过在所述柔性连接肽两端连接酶切位点获得的，所述融合蛋白为定位于线粒体的融合蛋白。

本发明还提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包括线粒体定位多肽、目的蛋白和标记蛋白，所述线粒体定位多肽和目的蛋白之间，以及目的蛋白和标记蛋白之间均通过所述接头连接。

本发明还提供一种核酸构建体，所述核酸构建体包括编码所述接头的多核苷酸或包括编码所述融合蛋白的多核苷酸。

本发明还提供一种细胞系，所述细胞系为线粒体内表达有所述融合蛋白的细胞系。

本发明还提供所述融合蛋白、分离的多核苷酸、核酸构建体在以下任一项或多项中的用途：

1)定位MT-ND1蛋白；

2)制备MT-ND1蛋白定位产品；

3)制备将MT-ND1导入线粒体的产品；

4)制备MT-ND1蛋白定性或定量检测产品；

5)制备研究MT-ND1与线粒体的相互作用的产品；

6)制备在线粒体中过表达MT-ND1的产品；

7)制备线粒体定位产品；