[发明专利]定位于线粒体的融合蛋白、接头及其用途

权利要求书

1.柔性连接肽在制备定位于线粒体的融合蛋白中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途为柔性连接肽在制备所述融合蛋白中接头的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述柔性连接肽选自(GGGGS)n、(G)n或(EAAAK)n，其中n≥3，n为整数；优选的，n为3或6。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述定位于线粒体的融合蛋白包括线粒体定位多肽、目的蛋白和标记蛋白，所述目的蛋白为MT-ND1。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述标记蛋白为荧光蛋白；优选的，所述融合蛋白为SCO1-MT-ND1-EGFP。

6.用于制备融合蛋白的接头，其特征在于，所述接头为通过在所述柔性连接肽两端连接酶切位点获得的，所述融合蛋白为定位于线粒体的融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的接头，其特征在于，柔性连接肽两端的酶切位点为不同的酶切位点。

8.根据权利要求6所述的接头，其特征在于，所述接头的氨基酸序列如SEQ ID NO.9～SEQ ID NO.11所示。

9.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括线粒体定位多肽、目的蛋白和标记蛋白，所述线粒体定位多肽和目的蛋白之间，以及目的蛋白和标记蛋白之间均通过权利要求6-8任一所述的接头连接。

10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述线粒体定位多肽选自SCO1、ATP5B、NDUFS2、MnSOD、SCO2、ATP5A1。

11.根据权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述线粒体定位多肽位于所述目的蛋白的N端或C端。

12.根据权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述目的蛋白为MT-ND1；优选的，所述MT-ND1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

13.根据权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述标记蛋白为荧光蛋白；优选的，所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、红色荧光蛋白或远红光荧光蛋白中的一种或多种。

14.根据权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述线粒体定位多肽和目的蛋白之间通过氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一接头连接，目的蛋白和标记蛋白之间通过氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的第二接头或氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的第三接头连接。

15.根据权利要求14所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白自N端至C端的结构选自以下任一：

1)线粒体定位多肽—第一接头—目的蛋白—第二接头—标记蛋白；

2)线粒体定位多肽—第一接头—目的蛋白—第三接头—标记蛋白；

3)标记蛋白—第二接头—目的蛋白—第一接头—线粒体定位多肽；

4)标记蛋白—第三接头—目的蛋白—第一接头—线粒体定位多肽。

16.根据权利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为SCO1-MT-ND1-EGFP；优选的，所述SCO1-MT-ND1-EGFP融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。

17.编码权利要求6-8任一所述的接头或权利要求10-16任一所述的融合蛋白的分离的多核苷酸。