[发明专利]一种适用于筛选高产天然氨基酸的菌株的方法

权利要求书

1.一种适用于筛选高产天然氨基酸菌株的方法，其方法的特征在于，包括含有翻译速率可控的指示基因和其对应的翻译元件。

2.如权利要求1所述指示基因，其特征在于，所述的指示基因包括但不限于编码荧光蛋白、抗生素抗性蛋白、颜色蛋白等基因。

3.如权利要求1所述翻译速率可控，其特征在于，指示基因翻译速率受控于氨基酸浓度。

4.如权利要求1所述指示基因，其特征在于，指示基因含有翻译目标氨基酸的重编码密码子。

5.如权利要求1所述菌株，其特征在于，所适用的菌株包括但不限于基因组上含有重编码密码子的微生物。

6.如权利要求5所述重编码密码子，其特征在于，重编码密码子包括但不限于终止密码子(UAG、UAA、UGA)，甲硫氨酸密码子(AUG)、苯丙氨酸密码子(UUC、UUU)、亮氨酸密码子(CUG、CUC、CUU、CUA、UUA、UUG)、异亮氨酸密码子(AUC、AUU、AUA)、缬氨酸密码子(GUU、GUC、GUA、GUG)、酪氨酸密码子(UAC、UAU)、组氨酸密码子(CAC、CAU)、谷氨酰胺密码子(CAG、CAA)、天冬酰胺密码子(AAC、AAU)、赖氨酸密码子(AAA、AAG)、天冬氨酸密码子(GAU、GAC)、谷氨酸密码子(GAA、GAG)、丝氨酸密码子(UCC、UCU、UCA、UCG、AGU、AGC)、脯氨酸密码子(CCA、CCU、CCG、CCC)、苏氨酸密码子(ACA、ACC、ACU、ACG)、丙氨酸密码子(GCA、GCC、GCG、GCU)、半胱氨酸密码子(UGC、UGU)、精氨酸密码子(CGC、CGU、CGA、CGG、AGA、AGG)、色氨酸密码子(UGG)、甘氨酸(GGU、GGC、GGA、GGG)，二联体、四联体等非三联体密码子，含有非天然碱基等的非天然密码子。

7.如权利要求1所述其对应的翻译元件，其特征在于，翻译元件包括但不限于可以解码重编码密码子的tRNA，且该tRNA与野生型tRNA相比具有较低的氨酰化反应速率。

8.如权利要求7所述较低的氨酰化反应速率，其产生的原因包括但不限于tRNA丰度较低、tRNA与氨酰-tRNA合成酶结合力较差。

9.如权利要求8所述tRNA与氨酰-tRNA合成酶结合力较差，其特征在于，氨酰-tRNA合成酶与tRNA反密码子环、D环、TΨC环等结构的亲和力降低。

10.如权利要求1所述氨基酸，其特征在于，包含组氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸、脯氨酸、缬氨酸、硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、5-羟基色氨酸。

11.如权利要求5所述微生物，其特征在于，所述微生物包括但不仅限于基因组上含有重编码密码子的梭菌属(Clostridium)、发酵单胞菌属(Zymonomas)、大肠埃希氏菌属(Escherichia)、沙门菌属(Salmonella)、红球菌属(Rhodococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肠球菌属(Enterococcus)、产碱杆菌属(Alcaligenes)、克雷伯氏菌属(Klesiella)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、节杆菌属(Arthrobacter)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、枯草芽孢杆菌属(Brevibacterium)、毕赤酵母属(Pichia)、念珠菌属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、聚球藻属(Synechococcus)、集胞藻属(Synechocystis)、鱼腥藻属(Anabaena)、罗尔斯通氏菌属(Ralstonia)、乳酸球菌属(Lactococcus)、酵母属(Saccharomyces)、短杆菌属(Brevibacterium)、曲霉(Aspergillus)、木霉菌属(Trichoderma)、节细菌属(Arthrobacter)、贪铜菌属(Cupriavidus)和微杆菌属(Microbacterium)。