[发明专利]生产五胺基酮戊酸的大肠杆菌及生产五胺基酮戊酸的方法

说明书

本发明提供一种生产五胺基酮戊酸的大肠杆菌，其具有双倍的pdxY基因。本发明还提供一种生产五胺基酮戊酸的方法，其包含提供上述大肠杆菌；以及将该大肠杆菌接种于含有碳源、异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷、甘胺酸、琥珀酸与吡哆醛的培养基中进行培养，以产生五胺基酮戊酸。通过如上所述的生产五胺基酮戊酸的大肠杆菌及使用其生产五胺基酮戊酸的方法，进而提供一种生长速度快同时具有高ALA产量的菌株以及一种能够快速且高产量地生产ALA的方法。

技术领域

本发明是关于一种生产五胺基酮戊酸的大肠杆菌及使用其生产五胺基酮 戊酸的方法，尤其是一种以基因重组方法制成的大肠杆菌。

背景技术

5-胺基酮戊酸(5-Aminolevulinic Acid)(以下简称ALA)是生物体中必需 的代谢中间体，ALA在农业领域有广泛的用途，例如，ALA可以作为除草剂、 杀虫剂、农作物生长的促进因子，此外，ALA也被运用于医疗诊断用途，例 如ALA可以用于作为癌细胞的标记物。目前ALA的生产方式主要是通过麸 胺酸棒状杆菌来生产ALA。

发明内容

然而，麸胺酸棒状杆菌的生长速度较慢，麸胺酸棒状杆菌需要较长的培 养时间才能达到较高的菌量，借此提升其ALA产量，亦即，麸胺酸棒状杆菌 的缓慢生长速度影响到ALA的生产效率。因此，如何开发出一种生长速度快 同时又能具有高ALA产量的菌株，仍为有待解决的问题。

本发明的目的即针对上述问题，提供一种大肠杆菌，其具有双倍的pdxY 基因，该大肠杆菌可生产五胺基酮戊酸。

如上所述的大肠杆菌，该大肠杆菌还包含RchemA基因。

如上所述的大肠杆菌，该大肠杆菌还包含pRARE质粒。

为达上述目的及其他目的，本发明提供一种大肠杆菌，其具有SEQ ID NO.1的序列，该大肠杆菌可生产五胺基酮戊酸。

如上所述的大肠杆菌，该大肠杆菌还具有SEQ ID NO.2的序列

如上所述的大肠杆菌，该大肠杆菌还包含pRARE质粒。

为达上述目的及其他目的，本发明提供一种生产五胺基酮戊酸的方法， 包含以下步骤：(a)提供如上所述的大肠杆菌；及(b)将该大肠杆菌接种于含 有碳源、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷、甘胺酸、琥珀酸与吡哆醛的培养基中进 行培养，以产生五胺基酮戊酸。

如上所述的方法，该碳源为由葡萄糖及甘油组成的混合碳源。

如上所述的方法，该培养基中含有铁离子。

通过如上所述的生产五胺基酮戊酸的大肠杆菌及使用其生产五胺基酮戊 酸的方法，提供一种生长速度快同时具有高ALA产量的菌株以及一种能够快 速且高产量地生产ALA的方法。

附图说明

图1示出本发明实施例1所使用的CRIM质粒图谱。

图2示出本发明实施例1所使用的SITAG质粒图谱。

图3示出本发明实施例1的大肠杆菌PIECE的ALA生产效率测试中质粒拷 贝数。

图4示出本发明实施例1的大肠杆菌PIECE的ALA生产效率测试中生物 量。

图5示出本发明实施例1的大肠杆菌PIECE的ALA生产效率测试中大肠杆 菌PIEC的ALA产量。

图6示出本发明实施例2所使用的pSIT质粒图谱。

图7示出本发明实施例2的大肠杆菌RcGI与其他重组大肠杆菌的生长速率 的比较结果。

图8示出本发明实施例2的大肠杆菌RcGI与其他重组大肠杆菌的ALA产 量的比较结果。