[发明专利]一种腺病毒载体重组新冠病毒B.1.617.2变异株疫苗及其应用

说明书

本发明公开了一种以人5型复制缺陷型腺病毒为载体的新冠变异株疫苗。所述疫苗以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，基因组中整合有经优化设计的新型冠状病毒B.1.617.2变异株刺突蛋白突变体编码基因（Ad5‑nCoV‑B.1.617.2）。该疫苗在宿主细胞中可以有效表达保护性抗原蛋白。使用该疫苗单次免疫即可激发针对B.1.617.2变异株的特异性抗体反应。与2019野生型新型冠状病毒疫苗联用，疫苗加强免疫后可以激发强烈且广谱的新冠病毒变异株中和抗体反应，具有显著的应用优势，尤其在异型加强免疫以及应对新冠B.1.617.2变异株疫情中优势尤为突出，可作为疫苗候选株，用于应对持续蔓延的新冠变异株疫情。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体而言，涉及一种重组新型冠状病毒B.1.617.2变异株疫苗。

背景技术

新冠病毒为RNA病毒，在持续传播过程中极易产生突变，并自然筛选出传播能力增强的优势变异株。B.1.617.2（Delta, 德尔塔）变异株样本最早于2020年3月采集自美国，随后在南非、印度尼西亚、英国等地相继采集到的该类型变异株样本，2020年10月份以后突变株在印度大量出现，该变体被确定为印度第二波疫情的驱动因素之一。2021年5月，B.1.617.2变异株开始在全球迅速蔓延；7月初，B.1.617.2变异株已在至少98个国家和地区出现；8月以后，全球范围内采集的新冠病毒株中，95%以上为B.1.617.2变异株；至2021年10月，B.1.617.2变异株覆盖率接近100%。

B.1.617.2变异株含有L452R、T478K、P681R等重要突变位点，导致该流行株一定程度上能够逃逸新冠原型株（记为“新冠病毒野生株”，下同）疫苗激发的抗体，进而引起新冠疫苗失效或保护力降低，为新冠疫情防控工作带来巨大压力。以新冠病毒野生株刺突蛋白为靶标抗原研制的疫苗mRNA-1273经两剂免疫，对新冠病毒野生株感染的保护率超过90%，然而针对德尔塔变异株保护率下降至约73%。同时，在卡塔尔开展的临床试验显示，另一款以新冠病毒野生株刺突蛋白为靶抗原的疫苗BNT162b2，两剂接种后有效率为51.9%，然而在相同地区该疫苗对Alpha型和Beta型突变株有效率超过75%。

本申请人前期研发的非复制型5 型腺病毒载体重组新型冠状病毒疫苗（CN111218459A）的I、II 期临床试验显示，该疫苗在受试者中有良好的安全性，99.5%的受试者产生了特异抗体，90%的受试者产生了特异性细胞免疫反应。同时，III期临床结果显示，单剂接种14 天后预防所有症状新冠肺炎的保护效力为68.8%，预防重症新冠肺炎的保护效力为95.5%，显示了优异的保护效果。然而，该疫苗同样为新冠病毒野生株刺突蛋白为主要保护性抗原构建而成。考虑到B.1.617.2在全球范围内广泛流行，同时新冠野生株疫苗对B.1.617.2病毒感染的保护率显著下降，本发明的目的就是提供一种针对新冠病毒B.1.617.2变异株的疫苗，以应对持续蔓延的变异株新冠疫情。

发明内容

基于上述发明目的，本发明首先提供了一种应对新型冠状病毒B.1.617.2变异株的刺突蛋白突变体，所述刺突蛋白突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。。

其次，本发明提供了编码上述新型冠状病毒B.1.617.2变异株刺突蛋白突变体的多核苷酸，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:2所示。

第三，本发明提供了一种含有上述多核苷酸的重组E1、E3联合缺失的人5型复制缺陷型腺病毒。所述多核苷酸以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺病毒E1基因的HEK293细胞为包装细胞系，经包装获得重组腺病毒载体新型冠状病毒。

第四，本发明提供了上述重组E1、E3联合缺失的人5型复制缺陷型腺病毒在制备预防新型冠状病毒肺炎疫苗中的应用。

在一个优选的实施方案中，所述重组E1、E3联合缺失的人5型复制缺陷型腺病毒被制备为注射剂、滴鼻剂、喷雾剂或吸入剂。