[发明专利]一种检测新型冠状病毒的引物探针组合及其应用

权利要求书

1.一种检测新型冠状病毒的引物探针组合，其特征在于，所述检测新型冠状病毒的引物探针组合包括分别特异性扩增并检测新型冠状病毒的N基因和ORF1ab基因的引物对和探针；

扩增所述N基因的引物对包括上游引物FP1和下游引物RP1；

所述上游引物FP1包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

所述下游引物RP1包括SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒的引物探针组合，其特征在于，检测所述N基因的探针包括探针P1；

优选地，所述探针P1包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；

优选地，所述探针P1的5’端修饰荧光素，所述探针P1的3’端修饰淬灭剂；

优选地，扩增所述ORF1ab基因的引物对包括上游引物FP2和下游引物RP2；

优选地，所述上游引物FP2包括SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；

优选地，所述下游引物RP2包括SEQ ID No.5所示的核苷酸序列；

优选地，检测所述ORF1ab基因的探针包括探针P2；

优选地，所述探针P2包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；

优选地，所述探针P2的5’端修饰荧光素，所述探针P2的3’端修饰淬灭剂。

3.根据权利要求1或2所述的检测新型冠状病毒的引物探针组合，其特征在于，所述检测新型冠状病毒的引物探针组合还包括特异性扩增并检测人核糖核酸酶P基因的引物对和探针；

优选地，扩增所述人核糖核酸酶P基因的引物对包括上游引物FP3和下游引物RP3；

优选地，所述上游引物FP3包括SEQ ID No.7所示的核苷酸序列；

优选地，所述下游引物RP3包括SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；

优选地，检测所述人核糖核酸酶P基因的探针包括探针P3；

优选地，所述探针P3包括SEQ ID No.9所示的核苷酸序列；

优选地，所述探针P3的5’端修饰荧光素，所述探针P3的3’端修饰淬灭剂。

4.一种检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述检测新型冠状病毒的试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的检测新型冠状病毒的引物探针组合和反应液；

优选地，所述反应液包括PCR缓冲液、酶混合液和水；

优选地，所述酶混合液包括Taq酶和逆转录酶；

优选地，所述酶混合液中Taq酶和逆转录酶的浓度各自独立的为3～8U/μL。

5.根据权利要求4所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述检测新型冠状病毒的试剂盒还包括新型冠状病毒阳性对照品和新型冠状病毒阴性对照品；

优选地，所述新型冠状病毒阳性对照品包括新型冠状病毒的N基因、新型冠状病毒的ORF1ab基因和人核糖核酸酶P基因；

优选地，所述新型冠状病毒阴性对照品包括生理盐水。

6.一种权利要求4或5所述的检测新型冠状病毒的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

(1)采集并处理待测RNA样品，将待测RNA样品、检测新型冠状病毒的引物探针组合加入反应液中，混合，得到PCR体系；

(2)对PCR体系进行扩增检测；

(3)根据扩增检测反应的Ct值，判断样品的阴阳性。

7.根据权利要求6所述的检测新型冠状病毒的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述PCR体系中FP1和RP1的终浓度各自独立的为0.1～1μM；

优选地，所述PCR体系中FP2和RP2的终浓度各自独立的为0.1～1μM；

优选地，所述PCR体系中FP3和RP3的终浓度各自独立的为0.1～1μM；

优选地，所述PCR体系中探针P1、探针P2和探针P3的终浓度各自独立的为50～250nM；

优选地，所述PCR体系中Taq酶的终浓度为0.05～0.1U/μL；

优选地，所述PCR体系中逆转录酶的终浓度为0.05～0.1U/μL。