[发明专利]一种L-肌肽、L-组氨酸、β-丙氨酸甲酯盐酸盐含量的快速测定方法

说明书

本发明提供了一种检测L‑肌肽中的L‑组氨酸和β‑丙氨酸甲酯盐酸盐的含量的方法，包括配制待测样品和标准品；使用高效液相色谱法，以无机和有机溶液的混合液为流动相，使用外标法来计算所述待测样品中L‑肌肽以及L‑组氨酸和β‑丙氨酸甲酯盐酸盐的含量。本发明的所述的检测方法操作简单、分析时间短、分离度高，能同时快速检测L‑肌肽、L‑组氨酸和β‑丙氨酸甲酯盐酸盐的含量。

技术领域

本发明涉及检测领域，具体涉及一种L-肌肽生产过程中L-肌肽、L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐含量的快速检测方法。

背景技术

L-肌肽广泛存在于机体组织的细胞内，在肌肉和中枢神经系统表达最高，在脊椎动物骨骼中，L-肌肽的含量约为1.6～20.6μmol/g，在猪肉、牛肉和鸡肉中的含量分别为4.8、2.0和15.0mmol，在人体肌肉中的含量为2～20mmol。随着对L-肌肽研究深入，学者们纷纷研究了L-肌肽的生物学特性。迄今为止，L-肌肽的许多生物学活性已被证实，如生理pH缓冲作用、螯合金属离子、清除自由基、抗氧化、防止蛋白质糖化、抗衰老、抗炎以及抗肿瘤等。

以L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐为底物，可酶法制备L-肌肽，在生产过程中，若底物转化不完全、纯化不彻底，将存在生产成本增加、L-肌肽成品中残留L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐的风险，因此建立一种快速高效的分析方法有利于控制生产过程和成品杂质。

L-肌肽的检测尚无国家标准，且未见L-肌肽生产过程中L-肌肽、L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐的快速检测方法报道。

文献CN202010513278.4中公开了一种L-肌肽和L-组氨酸的分离方法，其L-肌肽检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，以癸烷磺酸钠缓冲溶液(取癸烷磺酸钠1.22g、磷酸氢二钾11.41g溶于1000mL去离子水中，并以磷酸溶液调节PH至3.0即得)：乙腈＝78：22(v/v)进行洗脱，流速为1.0mL/min，检测器为紫外检测器，波长为215nm。该方法的检测流动相配制繁琐，且癸烷磺酸钠有一定的毒性，对实验人员及环境具有一定的危害。

宋扬等公开了一种“HPLC法测定大鼠脑组织游离天门冬氨酸、谷氨酸、L-肌肽及γ-氨基丁酸”的方法，其采用C18色谱柱，以乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，用邻苯二甲醛为柱前衍生剂，在荧光检测器下，采用二元梯度洗脱检测，检测时间长达45min以上，该方法样品检测时间较长，且使用梯度洗脱，过程较繁琐，不利于L-肌肽生产过程中的物质快速的检测。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种高效液相分析方法，可快速检测L-肌肽生产过程中L-肌肽、L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐的含量，方法操作简便，分析时间短、分离度高。

具体的，本发明采用的技术方案是：

一种测定包含L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐的L-肌肽中L-肌肽含量的方法，其包括：

配制待测样品和标准品，使用衍生化试剂进行柱前衍生化；

使用高效液相色谱法，以无机和有机溶液的混合液为流动相，使用外标法来计算所述待测样品中L-肌肽以及L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐的含量。

根据项1任一项所述的方法，其中，所述无机和有机溶液的混合液为乙酸钠溶液和乙腈的混合溶液，优选，所述乙酸钠溶液和乙腈按体积比混合的比例为75-65：25-35，优选为75-70：25-30。

根据项2所述的方法，其中，所述乙酸钠溶液的浓度为45-100mmol/L，优选为45-55mmol/L。

根据项2或3所述的方法，其中，所述乙酸钠溶液的pH值为4.0-5.5，优选为4.5-5.0。

根据项1-4中任一项所述的方法，其中，所述流动相的流速为0.6-1.0mL/min，优选为0.8-1.0mL/min。