[发明专利]同时检测四种猪繁殖障碍病原的多重荧光定量PCR引物和探针及其方法

说明书

本发明提供了一种同时检测四种猪繁殖障碍病原的多重荧光定量PCR引物和探针及其方法，包括针对猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒的四个基因PCV2‑cap、PCV3‑cap、PPV‑NS1和PRV‑gE的保守片段的引物和探针。本发明检测方法具有较高的特异性和敏感性，可较好地适配于多通道荧光PCR仪，能有效应用于四种猪繁殖障碍相关病原的检测与分析，能在较短的时间内完成疾病的诊断检测，以为科学合理地制定防控措施提供有效工具。

技术领域

本发明属于动物疫病的检测方法技术领域，具体涉及一种同时检测四种猪繁殖障碍病原的多重荧光定量PCR引物和探针及其方法。

背景技术

近年来，随着中国养猪业规模化、集约化发展，猪传染性疾病的发生和流行对生猪养殖的危害日趋加重，且多病原混合感染已成为当前猪群疫病流行的主要形式与特点。在生猪养殖过程中猪繁殖障碍类疾病是兽医临床中发病率较高的一类疾病，而引起这类疾病的病因非常复杂，通常由多种因素影响。可将其分为传染性猪繁殖障碍疾病和非传染性猪繁殖障碍疾病两类，规模化生猪养殖过程中主要受到传染性猪繁殖障碍疾病的侵害，例如猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)等，其症状有母猪不孕不育、流产、早产、产畸形胎、死胎、木乃伊，产弱仔，母猪发情异常，公猪出现睾丸炎、睾丸萎缩等。

值得注意的是，猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪伪狂犬病毒在临床诊断过程中具有比较相似的临床症状而较难确诊，常常导致无法及时发现疫病的传播。现有技术中公开了大量检测上述病毒的方法，如中国专利(申请公布号CN108265126A)公开了一种同时检测猪圆环病毒3型和猪圆环病毒2型的PCR方法，其分别以PCV3和PCV2基因组的保守区域设计两对特异性引物，建立了二重PCR检测方法，以实现对猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型快速准确检测并鉴定的目的。

如中国专利(申请公布号CN102071258A)公开了一种猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，其能同时检测猪细小病毒与猪伪狂犬病毒两种病毒，不能检测出猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪流感病毒，具有较好的特异性、重复性和敏感性，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒病的鉴别与诊断。

如中国专利(申请公布号CN102071257A)公开了一种猪细小病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性。

如中国专利(申请公布号CN102071256A)公开了猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测引物及方法，其能够同时检测PC V2、PRV两种DNA病毒，能最少检测180拷贝猪伪狂犬病毒质粒和215拷贝猪圆环病毒2型质粒，具有较好的敏感性、重复性与稳定性，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒病的鉴别与诊断。

如中国专利(申请公布号CN112553372A)公开了一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒及方法，其提供的引物探针、扩增试剂和方法对猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型的检测具有良好的敏感性、特异性、重复性和稳定性。

如中国专利(申请公布号CN102382902A)公开了一种CSFV、PCV2与PP V多重SYBRGreen I实时荧光PCR引物及其检测方法，其能够同时检测CSF V、PRV和PCV2三种DNA病毒，能最少检测183拷贝猪瘟病毒、231拷贝猪伪狂犬病毒和203拷贝猪圆环病毒2型。